浙江医学
浙江醫學
절강의학
ZHEJIANG MEDICAL JOURNAL
2012年
18期
1479-1482
,共4页
膜表达%聚苯丙赖氨酸%跨膜%载体构建%瘤苗
膜錶達%聚苯丙賴氨痠%跨膜%載體構建%瘤苗
막표체%취분병뢰안산%과막%재체구건%류묘
目的制备膜表达聚苯丙赖氨酸蛋白瘤苗并研究其抗肿瘤治疗作用.方法人工合成表达聚苯丙赖氨酸的DNA片断,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点BglⅡ、PstⅠ之间.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法转染到鼠CT26细胞.采用G418抗性筛选并扩增阳性克隆,化疗药处理后采用化学偶连两步法使跨膜型多聚苯丙赖氨酸与肠癌细胞膜共价偶连,构建成新型瘤苗,观察瘤苗体外免疫效应.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确,目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、流式细胞术、激光共聚焦显微镜证实聚苯丙赖氨酸表达在转染的鼠CT26细胞膜上,体外免疫学实验显示瘤苗细胞体外对淋巴细胞增殖刺激效应显示有较强的淋巴增殖效应,产生的多克隆抗体对CT26肠癌细胞有特异性杀伤作用.结论聚苯丙赖氨酸跨膜修饰的瘤苗能够产生特异、较强的免疫效应.
目的製備膜錶達聚苯丙賴氨痠蛋白瘤苗併研究其抗腫瘤治療作用.方法人工閤成錶達聚苯丙賴氨痠的DNA片斷,擴增成帶酶切位點的目的基因.選擇載體pDisplay,將目的基因插入載體多剋隆酶位點BglⅡ、PstⅠ之間.DNA測序證實後,以脂質體轉染的方法轉染到鼠CT26細胞.採用G418抗性篩選併擴增暘性剋隆,化療藥處理後採用化學偶連兩步法使跨膜型多聚苯丙賴氨痠與腸癌細胞膜共價偶連,構建成新型瘤苗,觀察瘤苗體外免疫效應.結果酶切電泳和DNA測序證實載體構建正確,目的基因的上遊帶信號肽序列,下遊帶跨膜序列.RT-PCR產物電泳、流式細胞術、激光共聚焦顯微鏡證實聚苯丙賴氨痠錶達在轉染的鼠CT26細胞膜上,體外免疫學實驗顯示瘤苗細胞體外對淋巴細胞增殖刺激效應顯示有較彊的淋巴增殖效應,產生的多剋隆抗體對CT26腸癌細胞有特異性殺傷作用.結論聚苯丙賴氨痠跨膜脩飾的瘤苗能夠產生特異、較彊的免疫效應.
목적제비막표체취분병뢰안산단백류묘병연구기항종류치료작용.방법인공합성표체취분병뢰안산적DNA편단,확증성대매절위점적목적기인.선택재체pDisplay,장목적기인삽입재체다극륭매위점BglⅡ、PstⅠ지간.DNA측서증실후,이지질체전염적방법전염도서CT26세포.채용G418항성사선병확증양성극륭,화료약처리후채용화학우련량보법사과막형다취분병뢰안산여장암세포막공개우련,구건성신형류묘,관찰류묘체외면역효응.결과매절전영화DNA측서증실재체구건정학,목적기인적상유대신호태서렬,하유대과막서렬.RT-PCR산물전영、류식세포술、격광공취초현미경증실취분병뢰안산표체재전염적서CT26세포막상,체외면역학실험현시류묘세포체외대림파세포증식자격효응현시유교강적림파증식효응,산생적다극륭항체대CT26장암세포유특이성살상작용.결론취분병뢰안산과막수식적류묘능구산생특이、교강적면역효응.
