河南大学学报（自然科学版）
河南大學學報（自然科學版）
하남대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HENAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2013年
4期
435-438
,共4页
李晓婷%谢欣梅%赵清辉%庞晓斌%杜冠华
李曉婷%謝訢梅%趙清輝%龐曉斌%杜冠華
리효정%사흔매%조청휘%방효빈%두관화
SHP-1%基因克隆%蛋白表达
SHP-1%基因剋隆%蛋白錶達
SHP-1%기인극륭%단백표체
SHP-1%gene cloning%protein expression
从人脑组织中提取mRNA,通过RT-PCR扩增出目标cDNA,构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1 pEASY-E1重组质粒.将重组质粒转化进E.coli TOP10感受态细胞中,筛选阳性克隆进行验证,将测序正确的质粒转化到E.coli Transetta感受态细胞中表达SHP-1.进一步对SHP-1表达的诱导温度和IPTG浓度等条件进行优化.结果显示,所克隆的SHP-1基因片断经PCR鉴定和测序分析,与目标基因完全相符.通过蛋白表达条件的优化,发现20℃,0.4 mmol/L IPTG对表达菌株进行诱导时,SHP-1可溶性蛋白表达量最大.
從人腦組織中提取mRNA,通過RT-PCR擴增齣目標cDNA,構建蛋白酪氨痠燐痠酶SHP-1 pEASY-E1重組質粒.將重組質粒轉化進E.coli TOP10感受態細胞中,篩選暘性剋隆進行驗證,將測序正確的質粒轉化到E.coli Transetta感受態細胞中錶達SHP-1.進一步對SHP-1錶達的誘導溫度和IPTG濃度等條件進行優化.結果顯示,所剋隆的SHP-1基因片斷經PCR鑒定和測序分析,與目標基因完全相符.通過蛋白錶達條件的優化,髮現20℃,0.4 mmol/L IPTG對錶達菌株進行誘導時,SHP-1可溶性蛋白錶達量最大.
종인뇌조직중제취mRNA,통과RT-PCR확증출목표cDNA,구건단백락안산린산매SHP-1 pEASY-E1중조질립.장중조질립전화진E.coli TOP10감수태세포중,사선양성극륭진행험증,장측서정학적질립전화도E.coli Transetta감수태세포중표체SHP-1.진일보대SHP-1표체적유도온도화IPTG농도등조건진행우화.결과현시,소극륭적SHP-1기인편단경PCR감정화측서분석,여목표기인완전상부.통과단백표체조건적우화,발현20℃,0.4 mmol/L IPTG대표체균주진행유도시,SHP-1가용성단백표체량최대.
