河南大学学报（自然科学版）
河南大學學報（自然科學版）
하남대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HENAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2014年
2期
196-201
,共6页
庞晓斌%谢欣梅%李晓婷%王守宝%杜冠华
龐曉斌%謝訢梅%李曉婷%王守寶%杜冠華
방효빈%사흔매%리효정%왕수보%두관화
PTP1B%PTPc%蛋白表达%酶活性
PTP1B%PTPc%蛋白錶達%酶活性
PTP1B%PTPc%단백표체%매활성
PTP1B%PTPc%protein expression%enzyme activity
通过设计引物,利用RT-PCR从人肝癌细胞(huh-7)中克隆蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)全长及功能域PT-Pc的cDNA序列并连接到pGEM-T Vector载体上,测序正确的cDNA序列连接到表达载体pET-32a(+)上,分别在大肠杆菌Transetta (DE3)和BL21 (DE3)菌株中稳定表达目标蛋白,经Ni2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯,通过酶促动力学方法分析两种蛋白的体外活性.本实验成功表达了PTP1B和PTPc可溶性蛋白,并发现Transetta (DE3)菌株较BL21(DE3)有更高的蛋白表达能力;酶促动力学分析表明,PTP1B全酶的Vmax为16.13mmol· L-1 ·s-1,Km为0.94 mmol/L;其功能域PTPc的Vmax为5.49 mmol·L-1·s-1,Km为0.54 mmol/L.表明PTP1B全酶的活性高于PTPc功能域的活性.
通過設計引物,利用RT-PCR從人肝癌細胞(huh-7)中剋隆蛋白酪氨痠燐痠酶(PTP1B)全長及功能域PT-Pc的cDNA序列併連接到pGEM-T Vector載體上,測序正確的cDNA序列連接到錶達載體pET-32a(+)上,分彆在大腸桿菌Transetta (DE3)和BL21 (DE3)菌株中穩定錶達目標蛋白,經Ni2+親和柱純化後目的蛋白達到瞭電泳純,通過酶促動力學方法分析兩種蛋白的體外活性.本實驗成功錶達瞭PTP1B和PTPc可溶性蛋白,併髮現Transetta (DE3)菌株較BL21(DE3)有更高的蛋白錶達能力;酶促動力學分析錶明,PTP1B全酶的Vmax為16.13mmol· L-1 ·s-1,Km為0.94 mmol/L;其功能域PTPc的Vmax為5.49 mmol·L-1·s-1,Km為0.54 mmol/L.錶明PTP1B全酶的活性高于PTPc功能域的活性.
통과설계인물,이용RT-PCR종인간암세포(huh-7)중극륭단백락안산린산매(PTP1B)전장급공능역PT-Pc적cDNA서렬병련접도pGEM-T Vector재체상,측서정학적cDNA서렬련접도표체재체pET-32a(+)상,분별재대장간균Transetta (DE3)화BL21 (DE3)균주중은정표체목표단백,경Ni2+친화주순화후목적단백체도료전영순,통과매촉동역학방법분석량충단백적체외활성.본실험성공표체료PTP1B화PTPc가용성단백,병발현Transetta (DE3)균주교BL21(DE3)유경고적단백표체능력;매촉동역학분석표명,PTP1B전매적Vmax위16.13mmol· L-1 ·s-1,Km위0.94 mmol/L;기공능역PTPc적Vmax위5.49 mmol·L-1·s-1,Km위0.54 mmol/L.표명PTP1B전매적활성고우PTPc공능역적활성.
