广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2014年
5期
639-642
,共4页
林月霞%陈咏娴%董斌%田素娟
林月霞%陳詠嫻%董斌%田素娟
림월하%진영한%동빈%전소연
乙酰肝素酶%基因转染%稳定表达%绿色荧光
乙酰肝素酶%基因轉染%穩定錶達%綠色熒光
을선간소매%기인전염%은정표체%록색형광
heparanase%gene transfected%stable expression%green fluorescence
目的 在CHO细胞中表达人乙酰肝素酶(HPA)并建立该酶的稳定表达细胞株.方法 在脂质体的介导下,用本实验室构建的pEGFP-N1-HPA重组质粒转染CHO细胞,经G418筛选稳定表达的细胞.通过荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达情况,同时通过RT-PCR检测HPA基因转录水平、免疫细胞化学法检测HPA蛋白表达、MTT方法测定外源基因对CHO细胞增殖的影响.结果 荧光显微镜下可见转染的CHO细胞有绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR证实转染细胞中存在HPA基因mRNA的表达,成功获得HPA的稳定表达细胞株.结论 成功建立人HPA稳定表达CHO细胞株,为该酶的功能研究奠定了基础.
目的 在CHO細胞中錶達人乙酰肝素酶(HPA)併建立該酶的穩定錶達細胞株.方法 在脂質體的介導下,用本實驗室構建的pEGFP-N1-HPA重組質粒轉染CHO細胞,經G418篩選穩定錶達的細胞.通過熒光顯微鏡觀察細胞綠色熒光蛋白的錶達情況,同時通過RT-PCR檢測HPA基因轉錄水平、免疫細胞化學法檢測HPA蛋白錶達、MTT方法測定外源基因對CHO細胞增殖的影響.結果 熒光顯微鏡下可見轉染的CHO細胞有綠色熒光蛋白的錶達,RT-PCR證實轉染細胞中存在HPA基因mRNA的錶達,成功穫得HPA的穩定錶達細胞株.結論 成功建立人HPA穩定錶達CHO細胞株,為該酶的功能研究奠定瞭基礎.
목적 재CHO세포중표체인을선간소매(HPA)병건립해매적은정표체세포주.방법 재지질체적개도하,용본실험실구건적pEGFP-N1-HPA중조질립전염CHO세포,경G418사선은정표체적세포.통과형광현미경관찰세포록색형광단백적표체정황,동시통과RT-PCR검측HPA기인전록수평、면역세포화학법검측HPA단백표체、MTT방법측정외원기인대CHO세포증식적영향.결과 형광현미경하가견전염적CHO세포유록색형광단백적표체,RT-PCR증실전염세포중존재HPA기인mRNA적표체,성공획득HPA적은정표체세포주.결론 성공건립인HPA은정표체CHO세포주,위해매적공능연구전정료기출.
