中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2014年
10期
3-5,中插1
,共4页
赵文年%包静月%王清华%刘春菊%王淑娟%雷程红%王志亮
趙文年%包靜月%王清華%劉春菊%王淑娟%雷程紅%王誌亮
조문년%포정월%왕청화%류춘국%왕숙연%뢰정홍%왕지량
小反刍兽疫%H蛋白%杆状病毒表达系统
小反芻獸疫%H蛋白%桿狀病毒錶達繫統
소반추수역%H단백%간상병독표체계통
应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒西藏分离株Tibet 07的血凝素蛋白,并对其抗原性进行鉴定.扩增小反刍兽疫病毒Tibet 07株H基因,克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒pFastBac-PPRV-H,转化感受态大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H,转染sf9细胞,通过异源基因重组获得杆状病毒,通过病毒蚀斑试验检测扩增后病毒滴度.将P3代病毒以0.05MOI感染sf9细胞,通过SDS-PAGE鉴定H蛋白的表达,利用Western blot和间接免疫荧光鉴定H蛋白的抗原性.经过PCR、测序等证明重组杆状病毒Bacmid-PPRV-H构建正确.P2代重组杆状病毒的病毒滴度为1×10.表达的H蛋白在相对分子量约68 kDa处可见特异蛋白条带.感染的sf9细胞可与小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体发生特异性反应.表明Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了小反刍兽疫病毒西藏分离榇Tibet 07的血凝素蛋白,为进一步研究其生物学功能及构建检测ELISA试剂盒奠定了试验基础.
應用Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統錶達小反芻獸疫病毒西藏分離株Tibet 07的血凝素蛋白,併對其抗原性進行鑒定.擴增小反芻獸疫病毒Tibet 07株H基因,剋隆至pFastBac/CT-TOPO載體中,構建重組穿梭質粒pFastBac-PPRV-H,轉化感受態大腸桿菌DH10BacTM,構建重組桿狀病毒Bacmid-PPRV-H,轉染sf9細胞,通過異源基因重組穫得桿狀病毒,通過病毒蝕斑試驗檢測擴增後病毒滴度.將P3代病毒以0.05MOI感染sf9細胞,通過SDS-PAGE鑒定H蛋白的錶達,利用Western blot和間接免疫熒光鑒定H蛋白的抗原性.經過PCR、測序等證明重組桿狀病毒Bacmid-PPRV-H構建正確.P2代重組桿狀病毒的病毒滴度為1×10.錶達的H蛋白在相對分子量約68 kDa處可見特異蛋白條帶.感染的sf9細胞可與小反芻獸疫病毒H蛋白的單剋隆抗體髮生特異性反應.錶明Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統錶達瞭小反芻獸疫病毒西藏分離櫬Tibet 07的血凝素蛋白,為進一步研究其生物學功能及構建檢測ELISA試劑盒奠定瞭試驗基礎.
응용Bac-to-Bac간상병독표체계통표체소반추수역병독서장분리주Tibet 07적혈응소단백,병대기항원성진행감정.확증소반추수역병독Tibet 07주H기인,극륭지pFastBac/CT-TOPO재체중,구건중조천사질립pFastBac-PPRV-H,전화감수태대장간균DH10BacTM,구건중조간상병독Bacmid-PPRV-H,전염sf9세포,통과이원기인중조획득간상병독,통과병독식반시험검측확증후병독적도.장P3대병독이0.05MOI감염sf9세포,통과SDS-PAGE감정H단백적표체,이용Western blot화간접면역형광감정H단백적항원성.경과PCR、측서등증명중조간상병독Bacmid-PPRV-H구건정학.P2대중조간상병독적병독적도위1×10.표체적H단백재상대분자량약68 kDa처가견특이단백조대.감염적sf9세포가여소반추수역병독H단백적단극륭항체발생특이성반응.표명Bac-to-Bac간상병독표체계통표체료소반추수역병독서장분리친Tibet 07적혈응소단백,위진일보연구기생물학공능급구건검측ELISA시제합전정료시험기출.
