南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2014年
10期
1475-1480
,共6页
王露%翟玮玮%杨向荣%王芳%李见%张强%李玉云
王露%翟瑋瑋%楊嚮榮%王芳%李見%張彊%李玉雲
왕로%적위위%양향영%왕방%리견%장강%리옥운
慢病毒%siRNA%Fas%脐带间充质干细胞
慢病毒%siRNA%Fas%臍帶間充質榦細胞
만병독%siRNA%Fas%제대간충질간세포
lentiviral vector%small interferiing RNA%Fas%umbilical cord mesenchymal stem cells
目的 应用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体,建立Fas基因稳定干扰的人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)株,为下一步使用低表达Fas基因的UC-MSCs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础.方法 以人Fas基因mRNA序列作为干扰靶点,设计4组靶向Fas的shRNA序列,合成寡核苷酸,与经过BamHI、EcoRI双酶切后的LV3载体连接获得重组慢病毒,通过感染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定.体外培养人UC-MSCs,使用包装好的慢病毒感染UC-MSCs,应用Real time-PCR和Western blotting检测感染后细胞中Fas mRNA及蛋白的表达情况.结果 经酶切以及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,病毒悬液滴度为3×l08 TU/ml.Real time-PCR和Western blotting结果显示干扰组细胞的Fas表达水平较对照组显著降低.结论 慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的表达.
目的 應用慢病毒介導的RNA榦擾技術,構建Fas基因的siRNA慢病毒錶達載體,建立Fas基因穩定榦擾的人臍帶間充質榦細胞(UC-MSCs)株,為下一步使用低錶達Fas基因的UC-MSCs治療再生障礙性貧血奠定實驗基礎.方法 以人Fas基因mRNA序列作為榦擾靶點,設計4組靶嚮Fas的shRNA序列,閤成寡覈苷痠,與經過BamHI、EcoRI雙酶切後的LV3載體連接穫得重組慢病毒,通過感染293T細胞對慢病毒進行包裝和滴度測定.體外培養人UC-MSCs,使用包裝好的慢病毒感染UC-MSCs,應用Real time-PCR和Western blotting檢測感染後細胞中Fas mRNA及蛋白的錶達情況.結果 經酶切以及基因測序鑒定證明慢病毒載體構建成功,病毒懸液滴度為3×l08 TU/ml.Real time-PCR和Western blotting結果顯示榦擾組細胞的Fas錶達水平較對照組顯著降低.結論 慢病毒介導的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的錶達.
목적 응용만병독개도적RNA간우기술,구건Fas기인적siRNA만병독표체재체,건립Fas기인은정간우적인제대간충질간세포(UC-MSCs)주,위하일보사용저표체Fas기인적UC-MSCs치료재생장애성빈혈전정실험기출.방법 이인Fas기인mRNA서렬작위간우파점,설계4조파향Fas적shRNA서렬,합성과핵감산,여경과BamHI、EcoRI쌍매절후적LV3재체련접획득중조만병독,통과감염293T세포대만병독진행포장화적도측정.체외배양인UC-MSCs,사용포장호적만병독감염UC-MSCs,응용Real time-PCR화Western blotting검측감염후세포중Fas mRNA급단백적표체정황.결과 경매절이급기인측서감정증명만병독재체구건성공,병독현액적도위3×l08 TU/ml.Real time-PCR화Western blotting결과현시간우조세포적Fas표체수평교대조조현저강저.결론 만병독개도적SiRNA능유효침묵UC-MSCs중Fas기인적표체.
