南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2014年
10期
1395-1401
,共7页
周浩%杨俊杰%王晶%胡舜英%陈光辉%陈韵岱
週浩%楊俊傑%王晶%鬍舜英%陳光輝%陳韻岱
주호%양준걸%왕정%호순영%진광휘%진운대
脂肪干细胞%Exendin-4%旁分泌%PI3K/Akt信号通路
脂肪榦細胞%Exendin-4%徬分泌%PI3K/Akt信號通路
지방간세포%Exendin-4%방분비%PI3K/Akt신호통로
adipose-derived stem cells%exendin-4%paracrine%PI3K/Akt signaling pathway
目的 探讨Exendin-4促进脂肪来源干细胞(ADSCs)旁分泌细胞因子的机制.方法 混合酶消化法提取和培养SD大鼠腹股沟处的脂肪干细胞,使用流式细胞学检测有或无Exendin-4处理后的第4代ADSCs表面标记物,MTT法绘制0、1、5、10、20 nm/L不同浓度Exendin-4下的ADSCs生长曲线;qPCR法检测不同浓度Exendin-4处理12h后bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的表达变化.Western blotting和qPCR检测Exendin-4对于Akt通路的作用.同时添加通路阻断剂LY-294002,使用ELISA检测Akt通路阻断后Exendin-4对于旁分泌蛋白的影响.结果 分离培养的ADSCs高表达CD29、CD90、CD105,低表达CD34、CD45,并且能够多向分化为脂肪细胞、骨细胞,符合间充质干细胞的表型特点.Exendin-4处理后,不仅不会改变ADSCs的表型,还能以浓度依赖方式促进ADSCs在体外增殖(P＜0.05).不同浓度Exendin-4处理ADSCs 12 h后,旁分泌蛋白bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的表达量逐渐提高,其中10 nm/LEx-4处理12 h可能为最佳处理浓度(P＜0.05).Western blotting和qPCR提示Exendin-4能够显著提高胞内Akt的磷酸化水平,而给予LY-294002后,磷酸化Akt表达减弱,同时ADSCs培养液上清中bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的含量也明显降低(P＜0.05).结论 短暂Exendin-4处理不会改变ADSCs表型,但能加强细胞的增殖能力,且以剂量依赖方式促进干细胞旁分泌细胞因子bFGF、VEGF、HGF、IGF-1.10 nm/L可能为Exendin-4最适促旁分泌浓度,其扩大干细胞旁分泌的机制部分是通过激活PI3K/Akt信号通路来介导.
目的 探討Exendin-4促進脂肪來源榦細胞(ADSCs)徬分泌細胞因子的機製.方法 混閤酶消化法提取和培養SD大鼠腹股溝處的脂肪榦細胞,使用流式細胞學檢測有或無Exendin-4處理後的第4代ADSCs錶麵標記物,MTT法繪製0、1、5、10、20 nm/L不同濃度Exendin-4下的ADSCs生長麯線;qPCR法檢測不同濃度Exendin-4處理12h後bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的錶達變化.Western blotting和qPCR檢測Exendin-4對于Akt通路的作用.同時添加通路阻斷劑LY-294002,使用ELISA檢測Akt通路阻斷後Exendin-4對于徬分泌蛋白的影響.結果 分離培養的ADSCs高錶達CD29、CD90、CD105,低錶達CD34、CD45,併且能夠多嚮分化為脂肪細胞、骨細胞,符閤間充質榦細胞的錶型特點.Exendin-4處理後,不僅不會改變ADSCs的錶型,還能以濃度依賴方式促進ADSCs在體外增殖(P＜0.05).不同濃度Exendin-4處理ADSCs 12 h後,徬分泌蛋白bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的錶達量逐漸提高,其中10 nm/LEx-4處理12 h可能為最佳處理濃度(P＜0.05).Western blotting和qPCR提示Exendin-4能夠顯著提高胞內Akt的燐痠化水平,而給予LY-294002後,燐痠化Akt錶達減弱,同時ADSCs培養液上清中bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的含量也明顯降低(P＜0.05).結論 短暫Exendin-4處理不會改變ADSCs錶型,但能加彊細胞的增殖能力,且以劑量依賴方式促進榦細胞徬分泌細胞因子bFGF、VEGF、HGF、IGF-1.10 nm/L可能為Exendin-4最適促徬分泌濃度,其擴大榦細胞徬分泌的機製部分是通過激活PI3K/Akt信號通路來介導.
목적 탐토Exendin-4촉진지방래원간세포(ADSCs)방분비세포인자적궤제.방법 혼합매소화법제취화배양SD대서복고구처적지방간세포,사용류식세포학검측유혹무Exendin-4처리후적제4대ADSCs표면표기물,MTT법회제0、1、5、10、20 nm/L불동농도Exendin-4하적ADSCs생장곡선;qPCR법검측불동농도Exendin-4처리12h후bFGF、VEGF、HGF、IGF-1적표체변화.Western blotting화qPCR검측Exendin-4대우Akt통로적작용.동시첨가통로조단제LY-294002,사용ELISA검측Akt통로조단후Exendin-4대우방분비단백적영향.결과 분리배양적ADSCs고표체CD29、CD90、CD105,저표체CD34、CD45,병차능구다향분화위지방세포、골세포,부합간충질간세포적표형특점.Exendin-4처리후,불부불회개변ADSCs적표형,환능이농도의뢰방식촉진ADSCs재체외증식(P＜0.05).불동농도Exendin-4처리ADSCs 12 h후,방분비단백bFGF、VEGF、HGF、IGF-1적표체량축점제고,기중10 nm/LEx-4처리12 h가능위최가처리농도(P＜0.05).Western blotting화qPCR제시Exendin-4능구현저제고포내Akt적린산화수평,이급여LY-294002후,린산화Akt표체감약,동시ADSCs배양액상청중bFGF、VEGF、HGF、IGF-1적함량야명현강저(P＜0.05).결론 단잠Exendin-4처리불회개변ADSCs표형,단능가강세포적증식능력,차이제량의뢰방식촉진간세포방분비세포인자bFGF、VEGF、HGF、IGF-1.10 nm/L가능위Exendin-4최괄촉방분비농도,기확대간세포방분비적궤제부분시통과격활PI3K/Akt신호통로래개도.
