CAJ | 학술논문

目的:利用ITS2序列对豆蔻类中药材进行DNA条形码鉴定研究.方法:本文采集了包括豆蔻两个基原白豆蔻Amomum kravanh与爪哇白豆蔻Amomum compactum、红豆蔻Alpinia galanga、草豆蔻Alpinia katsumadai等在内的70份样品,采用试剂盒法提取基因组DNA,应用Primer premier 5.0设计引物,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增其ITS2序列,并对PCR产物进行双向测序,所得序列经CodonCode Aligner V3.71拼接后,采用MEGA5.0软件进行序列比对,计算种内和种间距离,构建邻接树(Neighbor-joining tree,NJ Tree).ITS2序列采用基于隐马尔可夫模型(Hidden Markov model,HMM)的注释方法获得.结果:通过新设计引物扩增的序列可以注释到5.8S与28 S,扩增序列位于ITS2间隔区.采用新设计的引物,所有实验样品均可获得ITS2序列,NJ树结果显示不同种豆蔻类药材分别聚为一支,可以互相区分,且可以与其混伪品相互区分.另外,通过序列比对发现有5个SNP(s)存在于豆蔻与其它物种种间,且有2个稳定的SNP(s)存在于白豆蔻和爪哇白豆蔻种间,可用于二者的准确鉴定.结论:ITS2序列作为DNA条形码可准确稳定地鉴别不同种豆蔻类药材,本研究将为保障临床安全用药提供新的技术手段.
목적:이용ITS2서렬대두구류중약재진행DNA조형마감정연구.방법:본문채집료포괄두구량개기원백두구Amomum kravanh여조왜백두구Amomum compactum、홍두구Alpinia galanga、초두구Alpinia katsumadai등재내적70빈양품,채용시제합법제취기인조DNA,응용Primer premier 5.0설계인물,통과취합매련식반응(Polymerase Chain Reaction,PCR)확증기ITS2서렬,병대PCR산물진행쌍향측서,소득서렬경CodonCode Aligner V3.71병접후,채용MEGA5.0연건진행서렬비대,계산충내화충간거리,구건린접수(Neighbor-joining tree,NJ Tree).ITS2서렬채용기우은마이가부모형(Hidden Markov model,HMM)적주석방법획득.결과:통과신설계인물확증적서렬가이주석도5.8S여28 S,확증서렬위우ITS2간격구.채용신설계적인물,소유실험양품균가획득ITS2서렬,NJ수결과현시불동충두구류약재분별취위일지,가이호상구분,차가이여기혼위품상호구분.령외,통과서렬비대발현유5개SNP(s)존재우두구여기타물충충간,차유2개은정적SNP(s)존재우백두구화조왜백두구충간,가용우이자적준학감정.결론:ITS2서렬작위DNA조형마가준학은정지감별불동충두구류약재,본연구장위보장림상안전용약제공신적기술수단.