四川师范大学学报（自然科学版）
四川師範大學學報（自然科學版）
사천사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2014年
6期
911-916
,共6页
南极假丝酵母脂肪酶B%毕赤酵母%分泌表达%酶学性质
南極假絲酵母脂肪酶B%畢赤酵母%分泌錶達%酶學性質
남겁가사효모지방매B%필적효모%분비표체%매학성질
candida antarctica lipase B%pichia pastoris%secretory expression%enzyme properties
将南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA(含pAOX1启动子)和pGAPZαA(含pGAP启动子)中,转入毕赤酵母表达宿主KM71H,经三丁酸甘油酯平板活性筛选获得高效表达的酵母工程菌株.分泌型表达CLAB酵母工程菌的酶活较高,经摇瓶发酵96 h后,CLAB活力达到11.1 U/mL.经发酵罐高密度发酵84h后,CLAB活力达到179.2 U/mL,蛋白质量浓度为1.36 mg/mL.体积分数12％SDS-PAGE凝胶电泳显示重组CALB相对分子量为36 kDa.该酶最适温度为40℃,最适pH值为8.0.在pH7.5 ～9.5较稳定,经55℃保温1h,残余酶活还有48.5％.5 mmol/L Mg2+、Ni+、Co2+和体积分数0.10％ SDS对CALB酶活影响很小,而Zn2强烈抑制酶催化反应,体积分数0.05％ Triton X-100对CALB稍有激活作用.
將南極假絲酵母脂肪酶B(CALB)基因剋隆到畢赤酵母錶達載體pPICZαA(含pAOX1啟動子)和pGAPZαA(含pGAP啟動子)中,轉入畢赤酵母錶達宿主KM71H,經三丁痠甘油酯平闆活性篩選穫得高效錶達的酵母工程菌株.分泌型錶達CLAB酵母工程菌的酶活較高,經搖瓶髮酵96 h後,CLAB活力達到11.1 U/mL.經髮酵罐高密度髮酵84h後,CLAB活力達到179.2 U/mL,蛋白質量濃度為1.36 mg/mL.體積分數12％SDS-PAGE凝膠電泳顯示重組CALB相對分子量為36 kDa.該酶最適溫度為40℃,最適pH值為8.0.在pH7.5 ～9.5較穩定,經55℃保溫1h,殘餘酶活還有48.5％.5 mmol/L Mg2+、Ni+、Co2+和體積分數0.10％ SDS對CALB酶活影響很小,而Zn2彊烈抑製酶催化反應,體積分數0.05％ Triton X-100對CALB稍有激活作用.
장남겁가사효모지방매B(CALB)기인극륭도필적효모표체재체pPICZαA(함pAOX1계동자)화pGAPZαA(함pGAP계동자)중,전입필적효모표체숙주KM71H,경삼정산감유지평판활성사선획득고효표체적효모공정균주.분비형표체CLAB효모공정균적매활교고,경요병발효96 h후,CLAB활력체도11.1 U/mL.경발효관고밀도발효84h후,CLAB활력체도179.2 U/mL,단백질량농도위1.36 mg/mL.체적분수12％SDS-PAGE응효전영현시중조CALB상대분자량위36 kDa.해매최괄온도위40℃,최괄pH치위8.0.재pH7.5 ～9.5교은정,경55℃보온1h,잔여매활환유48.5％.5 mmol/L Mg2+、Ni+、Co2+화체적분수0.10％ SDS대CALB매활영향흔소,이Zn2강렬억제매최화반응,체적분수0.05％ Triton X-100대CALB초유격활작용.
