贵阳医学院学报
貴暘醫學院學報
귀양의학원학보
JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE
2014年
6期
794-799
,共6页
胡祖权%何天军%贾义%宋萍萍%邱炜%赵远波%曾柱
鬍祖權%何天軍%賈義%宋萍萍%邱煒%趙遠波%曾柱
호조권%하천군%가의%송평평%구위%조원파%증주
Gi蛋白%脂质体%转染%荧光蛋白%真核表达载体
Gi蛋白%脂質體%轉染%熒光蛋白%真覈錶達載體
Gi단백%지질체%전염%형광단백%진핵표체재체
Gi protein%liposomes%transfection%fluorescent protein%eukaryotic expression vector
目的:克隆抑制腺苷酸环化酶G蛋白(Gi蛋白)3个亚基α、β和γ基因,构建pEYFP-N-Giα1和pECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,完成其在真核细胞中的表达检测.方法:培养肝癌细胞HepG2,提取总RNA后反转录成cDNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增α、β和γ的编码基因,在α亚基两端添加酶切位点,在β和γ亚基两端分别添加酶切位点和连接肽,经酶切和连接得到Giα1和Giβ1-γ2,再将Giα1和Giβ1-γ2基因分别构建到荧光蛋白报告载体pEYFP-N1和pECFP-C1中,利用脂质体法将真核表达载体转染到肝癌细胞中,激光共聚焦显微镜观察分析其表达活性.结果:PCR扩增获得Gi蛋白α、β和γ亚基的编码基因,在两端添加酶切位点和连接肽后获得的Giα1和Giβ1-γ2基因,成功构建了pEYFP-N-Giα1和pECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,并在肝癌细胞中实现其真核细胞表达.结论:成功构建Gi蛋白的真核表达载体,并鉴定其在活细胞中具有表达活性.
目的:剋隆抑製腺苷痠環化酶G蛋白(Gi蛋白)3箇亞基α、β和γ基因,構建pEYFP-N-Giα1和pECFP-C-Giβ1-γ2真覈錶達載體,完成其在真覈細胞中的錶達檢測.方法:培養肝癌細胞HepG2,提取總RNA後反轉錄成cDNA,通過聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增α、β和γ的編碼基因,在α亞基兩耑添加酶切位點,在β和γ亞基兩耑分彆添加酶切位點和連接肽,經酶切和連接得到Giα1和Giβ1-γ2,再將Giα1和Giβ1-γ2基因分彆構建到熒光蛋白報告載體pEYFP-N1和pECFP-C1中,利用脂質體法將真覈錶達載體轉染到肝癌細胞中,激光共聚焦顯微鏡觀察分析其錶達活性.結果:PCR擴增穫得Gi蛋白α、β和γ亞基的編碼基因,在兩耑添加酶切位點和連接肽後穫得的Giα1和Giβ1-γ2基因,成功構建瞭pEYFP-N-Giα1和pECFP-C-Giβ1-γ2真覈錶達載體,併在肝癌細胞中實現其真覈細胞錶達.結論:成功構建Gi蛋白的真覈錶達載體,併鑒定其在活細胞中具有錶達活性.
목적:극륭억제선감산배화매G단백(Gi단백)3개아기α、β화γ기인,구건pEYFP-N-Giα1화pECFP-C-Giβ1-γ2진핵표체재체,완성기재진핵세포중적표체검측.방법:배양간암세포HepG2,제취총RNA후반전록성cDNA,통과취합매련식반응(PCR)확증α、β화γ적편마기인,재α아기량단첨가매절위점,재β화γ아기량단분별첨가매절위점화련접태,경매절화련접득도Giα1화Giβ1-γ2,재장Giα1화Giβ1-γ2기인분별구건도형광단백보고재체pEYFP-N1화pECFP-C1중,이용지질체법장진핵표체재체전염도간암세포중,격광공취초현미경관찰분석기표체활성.결과:PCR확증획득Gi단백α、β화γ아기적편마기인,재량단첨가매절위점화련접태후획득적Giα1화Giβ1-γ2기인,성공구건료pEYFP-N-Giα1화pECFP-C-Giβ1-γ2진핵표체재체,병재간암세포중실현기진핵세포표체.결론:성공구건Gi단백적진핵표체재체,병감정기재활세포중구유표체활성.
