微生物学杂志
微生物學雜誌
미생물학잡지
JOURNAL OF MICROBIOLOGY
2014年
5期
44-48
,共5页
陈梦雪%卢欣睿%马玉%孙明波%罗维佳%王培琪%章朦玥%张怡轩
陳夢雪%盧訢睿%馬玉%孫明波%囉維佳%王培琪%章朦玥%張怡軒
진몽설%로흔예%마옥%손명파%라유가%왕배기%장몽모%장이헌
磷脂酰丝氨酸合成酶%基因重组%同源模建%突变
燐脂酰絲氨痠閤成酶%基因重組%同源模建%突變
린지선사안산합성매%기인중조%동원모건%돌변
phosphatidyl serine synthase%gene recombination%homogeneity modeling%mutation
为了提高目的蛋白磷脂酰丝氨酸合成酶(PSS)的表达,使用rTaq酶从E.coli K12总DNA中PCR扩增获得磷脂酰丝氨酸合成酶基因片段,将其重组于高效表达载体pET28b质粒,转入相应表达菌株进行表达,收集菌体超声破碎获得含PSS的粗酶液,使用两相反应体系进行生物转化,HPLC-ELSD手段进行酶活检测.结果显示,重组菌株中PSS的酶活力比对照有所提高,同时获得酶活力提高的突变基因pssE210G.将突变基因重组于更高效的表达载体pBAD-MCS,转入相应宿主菌株表达.结果显示E.coli TOP10(pBAD-MCS-pss)表达的酶活性明显优于E.coli BL21(pET28b-pss)中表达的酶活性.以上实验结果表明,将目的基因重组于高效表达质粒有助于提高酶活力;组合到不同的表达质粒,酶活提高程度不同;磷脂酰丝氨酸合成酶基因第73位氨基酸发生突变,对其酶结构和酶活力有直接的影响.
為瞭提高目的蛋白燐脂酰絲氨痠閤成酶(PSS)的錶達,使用rTaq酶從E.coli K12總DNA中PCR擴增穫得燐脂酰絲氨痠閤成酶基因片段,將其重組于高效錶達載體pET28b質粒,轉入相應錶達菌株進行錶達,收集菌體超聲破碎穫得含PSS的粗酶液,使用兩相反應體繫進行生物轉化,HPLC-ELSD手段進行酶活檢測.結果顯示,重組菌株中PSS的酶活力比對照有所提高,同時穫得酶活力提高的突變基因pssE210G.將突變基因重組于更高效的錶達載體pBAD-MCS,轉入相應宿主菌株錶達.結果顯示E.coli TOP10(pBAD-MCS-pss)錶達的酶活性明顯優于E.coli BL21(pET28b-pss)中錶達的酶活性.以上實驗結果錶明,將目的基因重組于高效錶達質粒有助于提高酶活力;組閤到不同的錶達質粒,酶活提高程度不同;燐脂酰絲氨痠閤成酶基因第73位氨基痠髮生突變,對其酶結構和酶活力有直接的影響.
위료제고목적단백린지선사안산합성매(PSS)적표체,사용rTaq매종E.coli K12총DNA중PCR확증획득린지선사안산합성매기인편단,장기중조우고효표체재체pET28b질립,전입상응표체균주진행표체,수집균체초성파쇄획득함PSS적조매액,사용량상반응체계진행생물전화,HPLC-ELSD수단진행매활검측.결과현시,중조균주중PSS적매활력비대조유소제고,동시획득매활력제고적돌변기인pssE210G.장돌변기인중조우경고효적표체재체pBAD-MCS,전입상응숙주균주표체.결과현시E.coli TOP10(pBAD-MCS-pss)표체적매활성명현우우E.coli BL21(pET28b-pss)중표체적매활성.이상실험결과표명,장목적기인중조우고효표체질립유조우제고매활력;조합도불동적표체질립,매활제고정도불동;린지선사안산합성매기인제73위안기산발생돌변,대기매결구화매활력유직접적영향.
