安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2014年
11期
1582-1586
,共5页
王德慧%谭林林%王琴%陈芳红%李涛%王慧
王德慧%譚林林%王琴%陳芳紅%李濤%王慧
왕덕혜%담림림%왕금%진방홍%리도%왕혜
艰难梭菌%鞭毛帽蛋白FliD%重组表达%流式细胞术%黏附因子
艱難梭菌%鞭毛帽蛋白FliD%重組錶達%流式細胞術%黏附因子
간난사균%편모모단백FliD%중조표체%류식세포술%점부인자
Clostridium difficile%flagellar cap protein FliD%recombinant expression%flow cytometry%adherence factor
目的 验证艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD的黏附细胞活性以推测其在艰难梭菌感染中的作用,并鉴定其抗原性以测试其应用于候选艰难梭菌疫苗组分的可能性.方法 PCR获取VPI 10463全长fliD基因,构建pET-22b-fliD原核表达质粒,转化至BL21(DE3)中,诱导表达,Ni2+亲和层析纯化,进行N端测序验证.蛋白3次皮下免疫大耳白兔后间接ELISA法检测其血清特异IgG水平并鉴定抗原性.间接免疫荧光染色后流式细胞术检测黏附Vero细胞能力.结果 VPI10463的fliD基因钓取成功,与GenBank公布的其他9株艰难梭菌的fliD基因相似度在89％～100％.pET-22b-fliD表达质粒构建成功,表达蛋白大小为56 ku,N端测序序列为MSSIS,与预期一致.一步纯化得到的蛋白纯度为99％以上.ELISA检测3次免疫后效价达到105.用流式细胞术检测其可以黏附在Vero细胞表面.结论 构建的pET-22b-fliD表达质粒成功表达FliD,具有黏附细胞活性,在艰难梭菌感染过程中起黏附因子作用,其具有较高的抗原性可以作为预防艰难梭菌感染的候选抗原之一.
目的 驗證艱難梭菌鞭毛帽蛋白FliD的黏附細胞活性以推測其在艱難梭菌感染中的作用,併鑒定其抗原性以測試其應用于候選艱難梭菌疫苗組分的可能性.方法 PCR穫取VPI 10463全長fliD基因,構建pET-22b-fliD原覈錶達質粒,轉化至BL21(DE3)中,誘導錶達,Ni2+親和層析純化,進行N耑測序驗證.蛋白3次皮下免疫大耳白兔後間接ELISA法檢測其血清特異IgG水平併鑒定抗原性.間接免疫熒光染色後流式細胞術檢測黏附Vero細胞能力.結果 VPI10463的fliD基因釣取成功,與GenBank公佈的其他9株艱難梭菌的fliD基因相似度在89％～100％.pET-22b-fliD錶達質粒構建成功,錶達蛋白大小為56 ku,N耑測序序列為MSSIS,與預期一緻.一步純化得到的蛋白純度為99％以上.ELISA檢測3次免疫後效價達到105.用流式細胞術檢測其可以黏附在Vero細胞錶麵.結論 構建的pET-22b-fliD錶達質粒成功錶達FliD,具有黏附細胞活性,在艱難梭菌感染過程中起黏附因子作用,其具有較高的抗原性可以作為預防艱難梭菌感染的候選抗原之一.
목적 험증간난사균편모모단백FliD적점부세포활성이추측기재간난사균감염중적작용,병감정기항원성이측시기응용우후선간난사균역묘조분적가능성.방법 PCR획취VPI 10463전장fliD기인,구건pET-22b-fliD원핵표체질립,전화지BL21(DE3)중,유도표체,Ni2+친화층석순화,진행N단측서험증.단백3차피하면역대이백토후간접ELISA법검측기혈청특이IgG수평병감정항원성.간접면역형광염색후류식세포술검측점부Vero세포능력.결과 VPI10463적fliD기인조취성공,여GenBank공포적기타9주간난사균적fliD기인상사도재89％～100％.pET-22b-fliD표체질립구건성공,표체단백대소위56 ku,N단측서서렬위MSSIS,여예기일치.일보순화득도적단백순도위99％이상.ELISA검측3차면역후효개체도105.용류식세포술검측기가이점부재Vero세포표면.결론 구건적pET-22b-fliD표체질립성공표체FliD,구유점부세포활성,재간난사균감염과정중기점부인자작용,기구유교고적항원성가이작위예방간난사균감염적후선항원지일.
