安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2014年
11期
1553-1557
,共5页
熊为国%孙洁%黄伟%郑泽琪
熊為國%孫潔%黃偉%鄭澤琪
웅위국%손길%황위%정택기
p53上调凋亡调制物%定点突变%蛋白稳定性%细胞凋亡%Hela细胞
p53上調凋亡調製物%定點突變%蛋白穩定性%細胞凋亡%Hela細胞
p53상조조망조제물%정점돌변%단백은정성%세포조망%Hela세포
p53 up-regulated modulator of apoptosis%site-directed mutagenesis%protein stability%apoptosis%Hela cells
目的 观察突变型PUMA和野生型PUMA对Hela细胞在促凋亡及抑制肿瘤细胞增殖方面的生物学功能差异,并探讨导致这些差异的分子机制.方法 实验随机分为:空载体质粒组、野生型PUMA组、突变型PUMA 3个实验组,应用脂质体转染方法分别将空载质粒、野生型PUMA质粒、突变型PUMA质粒转染Hela细胞中,转染24、48 h后用实时定量PCR和Western blot法检测各组PUMA表达情况;野生型实验组和突变型实验组分别加入蛋白质合成抑制剂放线菌酮后,Western blot法检测PUMA蛋白的表达;MTT及流式细胞术检测野生型PUMA与突变型PUMA对细胞增殖抑制和促凋亡作用.结果 在相同转染效率的情况下,通过Western blot法分析野生型PUMA组和突变型PUMA组的表达水平,结果表明突变型PUMA蛋白比野生型PUMA蛋白有一个更高的稳定状态.转染24 h后诱导表达野生型和突变型的PUMA细胞中均加入放线菌酮,结果表明,突变型PUMA蛋白降解延迟、半衰期延长;光密度值测定结果显示细胞转染两种质粒后,细胞存活率随着时间的延长逐渐下降,且转染突变型PUMA质粒在24、48 h的存活率均比野生型PUMA组低(P＜0.05,P＜0.01);流式细胞术结果显示,随着PUMA转染时间的增加,野生型和突变型两组肿瘤细胞的凋亡率均逐渐升高,并且突变型组细胞比野生型组细胞的凋亡率增加更加明显(P＜0.05,P＜0.01).结论 PUMA具有抑制Hela细胞增殖、促进其凋亡的作用,而其10号位的丝氨酸被丙氨酸取代后增加了突变型PUMA的稳定性、延长了其半衰期,导致突变型比野生型PUMA对Hela细胞的抑制作用及促凋亡功能得到加强.
目的 觀察突變型PUMA和野生型PUMA對Hela細胞在促凋亡及抑製腫瘤細胞增殖方麵的生物學功能差異,併探討導緻這些差異的分子機製.方法 實驗隨機分為:空載體質粒組、野生型PUMA組、突變型PUMA 3箇實驗組,應用脂質體轉染方法分彆將空載質粒、野生型PUMA質粒、突變型PUMA質粒轉染Hela細胞中,轉染24、48 h後用實時定量PCR和Western blot法檢測各組PUMA錶達情況;野生型實驗組和突變型實驗組分彆加入蛋白質閤成抑製劑放線菌酮後,Western blot法檢測PUMA蛋白的錶達;MTT及流式細胞術檢測野生型PUMA與突變型PUMA對細胞增殖抑製和促凋亡作用.結果 在相同轉染效率的情況下,通過Western blot法分析野生型PUMA組和突變型PUMA組的錶達水平,結果錶明突變型PUMA蛋白比野生型PUMA蛋白有一箇更高的穩定狀態.轉染24 h後誘導錶達野生型和突變型的PUMA細胞中均加入放線菌酮,結果錶明,突變型PUMA蛋白降解延遲、半衰期延長;光密度值測定結果顯示細胞轉染兩種質粒後,細胞存活率隨著時間的延長逐漸下降,且轉染突變型PUMA質粒在24、48 h的存活率均比野生型PUMA組低(P＜0.05,P＜0.01);流式細胞術結果顯示,隨著PUMA轉染時間的增加,野生型和突變型兩組腫瘤細胞的凋亡率均逐漸升高,併且突變型組細胞比野生型組細胞的凋亡率增加更加明顯(P＜0.05,P＜0.01).結論 PUMA具有抑製Hela細胞增殖、促進其凋亡的作用,而其10號位的絲氨痠被丙氨痠取代後增加瞭突變型PUMA的穩定性、延長瞭其半衰期,導緻突變型比野生型PUMA對Hela細胞的抑製作用及促凋亡功能得到加彊.
목적 관찰돌변형PUMA화야생형PUMA대Hela세포재촉조망급억제종류세포증식방면적생물학공능차이,병탐토도치저사차이적분자궤제.방법 실험수궤분위:공재체질립조、야생형PUMA조、돌변형PUMA 3개실험조,응용지질체전염방법분별장공재질립、야생형PUMA질립、돌변형PUMA질립전염Hela세포중,전염24、48 h후용실시정량PCR화Western blot법검측각조PUMA표체정황;야생형실험조화돌변형실험조분별가입단백질합성억제제방선균동후,Western blot법검측PUMA단백적표체;MTT급류식세포술검측야생형PUMA여돌변형PUMA대세포증식억제화촉조망작용.결과 재상동전염효솔적정황하,통과Western blot법분석야생형PUMA조화돌변형PUMA조적표체수평,결과표명돌변형PUMA단백비야생형PUMA단백유일개경고적은정상태.전염24 h후유도표체야생형화돌변형적PUMA세포중균가입방선균동,결과표명,돌변형PUMA단백강해연지、반쇠기연장;광밀도치측정결과현시세포전염량충질립후,세포존활솔수착시간적연장축점하강,차전염돌변형PUMA질립재24、48 h적존활솔균비야생형PUMA조저(P＜0.05,P＜0.01);류식세포술결과현시,수착PUMA전염시간적증가,야생형화돌변형량조종류세포적조망솔균축점승고,병차돌변형조세포비야생형조세포적조망솔증가경가명현(P＜0.05,P＜0.01).결론 PUMA구유억제Hela세포증식、촉진기조망적작용,이기10호위적사안산피병안산취대후증가료돌변형PUMA적은정성、연장료기반쇠기,도치돌변형비야생형PUMA대Hela세포적억제작용급촉조망공능득도가강.
