安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2014年
11期
1531-1534
,共4页
李克娟%顾彧%刘晓颖%范礼斌
李剋娟%顧彧%劉曉穎%範禮斌
리극연%고욱%류효영%범례빈
AK3%细胞定位%免疫荧光
AK3%細胞定位%免疫熒光
AK3%세포정위%면역형광
AK3%cellular localization%immunofluorescence
目的 运用基因克隆技术构建带FLAG标签的腺苷酸激酶3(AK3)真核表达载体,观察其在哺乳动物细胞内的定位和表达情况.方法 以人AK3全长的cDNA序列的菌液为模板,设计带有FLAG标签的引物,用PCR方法构建出真核表达载体pcDNA3.1-AK3-FLAG.运用免疫荧光及Western blot法检测其在哺乳动物细胞中的定位与表达情况.结果 成功构建了pcDNA3.1-AK3-FLAG质粒;荧光定位试验表明AK3在COS7细胞的胞质中呈斑点状分布,细胞核中未见明显分布;Western blot法检测表明AK3在HEK-293T细胞中能有效表达.结论 AK3在哺乳动物细胞内能够有效表达和定位,为进一步研究AK3和其他蛋白之间的相互作用奠定了基础.
目的 運用基因剋隆技術構建帶FLAG標籤的腺苷痠激酶3(AK3)真覈錶達載體,觀察其在哺乳動物細胞內的定位和錶達情況.方法 以人AK3全長的cDNA序列的菌液為模闆,設計帶有FLAG標籤的引物,用PCR方法構建齣真覈錶達載體pcDNA3.1-AK3-FLAG.運用免疫熒光及Western blot法檢測其在哺乳動物細胞中的定位與錶達情況.結果 成功構建瞭pcDNA3.1-AK3-FLAG質粒;熒光定位試驗錶明AK3在COS7細胞的胞質中呈斑點狀分佈,細胞覈中未見明顯分佈;Western blot法檢測錶明AK3在HEK-293T細胞中能有效錶達.結論 AK3在哺乳動物細胞內能夠有效錶達和定位,為進一步研究AK3和其他蛋白之間的相互作用奠定瞭基礎.
목적 운용기인극륭기술구건대FLAG표첨적선감산격매3(AK3)진핵표체재체,관찰기재포유동물세포내적정위화표체정황.방법 이인AK3전장적cDNA서렬적균액위모판,설계대유FLAG표첨적인물,용PCR방법구건출진핵표체재체pcDNA3.1-AK3-FLAG.운용면역형광급Western blot법검측기재포유동물세포중적정위여표체정황.결과 성공구건료pcDNA3.1-AK3-FLAG질립;형광정위시험표명AK3재COS7세포적포질중정반점상분포,세포핵중미견명현분포;Western blot법검측표명AK3재HEK-293T세포중능유효표체.결론 AK3재포유동물세포내능구유효표체화정위,위진일보연구AK3화기타단백지간적상호작용전정료기출.
