农学学报
農學學報
농학학보
Chinese Countryside Well-off Technology
2014年
11期
80-84
,共5页
李言%崔翠菊%罗世菊%李晓捷%赵聚萍%赛珊%钱瑞%武瑞娜
李言%崔翠菊%囉世菊%李曉捷%趙聚萍%賽珊%錢瑞%武瑞娜
리언%최취국%라세국%리효첩%조취평%새산%전서%무서나
海带属%配子体%DNA提取%ISSR%体系优化
海帶屬%配子體%DNA提取%ISSR%體繫優化
해대속%배자체%DNA제취%ISSR%체계우화
为了建立一个重现性好、稳定性高,适用于海带属ISSR遗传分析的PCR反应体系,从海带属配子体材料中提取基因组DNA作为模板,应用正交设计试验对反应体系中各因子的不同浓度进行组合优化.结果显示:适用于海带ISSR扩增反应的最佳体系(20 μL)为:1×PCR buffer,1.2 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L dNTPs,1.0 μmol/L ISSR引物,40 ng模板DNA,0.25 UTaq DNA聚合酶;扩增PCR程序为:95℃预变性3 min; 95℃变性45 s,52℃退火45 s,72℃延伸2min,共38个循环;最后72℃延伸10 min.在优化的海带ISSR反应条件下,扩增条带稳定,重现性好,为应用ISSR分子标记技术进行海带属遗传多样性研究和分子鉴定奠定了技术基础.
為瞭建立一箇重現性好、穩定性高,適用于海帶屬ISSR遺傳分析的PCR反應體繫,從海帶屬配子體材料中提取基因組DNA作為模闆,應用正交設計試驗對反應體繫中各因子的不同濃度進行組閤優化.結果顯示:適用于海帶ISSR擴增反應的最佳體繫(20 μL)為:1×PCR buffer,1.2 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L dNTPs,1.0 μmol/L ISSR引物,40 ng模闆DNA,0.25 UTaq DNA聚閤酶;擴增PCR程序為:95℃預變性3 min; 95℃變性45 s,52℃退火45 s,72℃延伸2min,共38箇循環;最後72℃延伸10 min.在優化的海帶ISSR反應條件下,擴增條帶穩定,重現性好,為應用ISSR分子標記技術進行海帶屬遺傳多樣性研究和分子鑒定奠定瞭技術基礎.
위료건립일개중현성호、은정성고,괄용우해대속ISSR유전분석적PCR반응체계,종해대속배자체재료중제취기인조DNA작위모판,응용정교설계시험대반응체계중각인자적불동농도진행조합우화.결과현시:괄용우해대ISSR확증반응적최가체계(20 μL)위:1×PCR buffer,1.2 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L dNTPs,1.0 μmol/L ISSR인물,40 ng모판DNA,0.25 UTaq DNA취합매;확증PCR정서위:95℃예변성3 min; 95℃변성45 s,52℃퇴화45 s,72℃연신2min,공38개순배;최후72℃연신10 min.재우화적해대ISSR반응조건하,확증조대은정,중현성호,위응용ISSR분자표기기술진행해대속유전다양성연구화분자감정전정료기술기출.
