医学信息
醫學信息
의학신식
MEDICAL INFORMATION
2014年
37期
51-52
,共2页
Pitx3%慢病毒%载体构建%过表达
Pitx3%慢病毒%載體構建%過錶達
Pitx3%만병독%재체구건%과표체
目的：构建并包装大鼠Pitx3基因过表达慢病毒并建立稳定过表达Pitx3基因的MES23.5多巴胺能神经细胞株。方法采用RT-PCR方法扩增Pitx3基因片段并将其连接于含有嘌呤霉素抗性的Plv-cs2.0-N-FLAG载体质粒，采用慢病毒包装四质粒系统(pRRE/pVSVS/pREV/pLV)，用转染试剂Lipofectamine 2000将四质粒按一定比例转染293T细胞；收集慢病毒上清并感染MES23.5细胞株，嘌呤霉素稳定表达Pitx3的MES23.5细胞株，Western blot ing检测Pitx3蛋白的表达。结果限制性内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳结果表明在900bp处有一明显条带；Pitx3测序结果显示序列与gene bank上的序列完全一致；嘌呤霉素筛选病毒感染的MES23.5细胞，传代筛选第5代后细胞几乎无死亡现象；Western blot ing结果显示，在分子量为43kDa处有相应条带。结论成功构建过表达Pitx3基因的慢病毒表达载体并建立了稳定表达Pitx3基因的MES23.5细胞株，此研究为进一步探讨Pitx3基因的功能提供了良好的研究工具。
目的：構建併包裝大鼠Pitx3基因過錶達慢病毒併建立穩定過錶達Pitx3基因的MES23.5多巴胺能神經細胞株。方法採用RT-PCR方法擴增Pitx3基因片段併將其連接于含有嘌呤黴素抗性的Plv-cs2.0-N-FLAG載體質粒，採用慢病毒包裝四質粒繫統(pRRE/pVSVS/pREV/pLV)，用轉染試劑Lipofectamine 2000將四質粒按一定比例轉染293T細胞；收集慢病毒上清併感染MES23.5細胞株，嘌呤黴素穩定錶達Pitx3的MES23.5細胞株，Western blot ing檢測Pitx3蛋白的錶達。結果限製性內切酶酶切及瓊脂糖凝膠電泳結果錶明在900bp處有一明顯條帶；Pitx3測序結果顯示序列與gene bank上的序列完全一緻；嘌呤黴素篩選病毒感染的MES23.5細胞，傳代篩選第5代後細胞幾乎無死亡現象；Western blot ing結果顯示，在分子量為43kDa處有相應條帶。結論成功構建過錶達Pitx3基因的慢病毒錶達載體併建立瞭穩定錶達Pitx3基因的MES23.5細胞株，此研究為進一步探討Pitx3基因的功能提供瞭良好的研究工具。
목적：구건병포장대서Pitx3기인과표체만병독병건립은정과표체Pitx3기인적MES23.5다파알능신경세포주。방법채용RT-PCR방법확증Pitx3기인편단병장기련접우함유표령매소항성적Plv-cs2.0-N-FLAG재체질립，채용만병독포장사질립계통(pRRE/pVSVS/pREV/pLV)，용전염시제Lipofectamine 2000장사질립안일정비례전염293T세포；수집만병독상청병감염MES23.5세포주，표령매소은정표체Pitx3적MES23.5세포주，Western blot ing검측Pitx3단백적표체。결과한제성내절매매절급경지당응효전영결과표명재900bp처유일명현조대；Pitx3측서결과현시서렬여gene bank상적서렬완전일치；표령매소사선병독감염적MES23.5세포，전대사선제5대후세포궤호무사망현상；Western blot ing결과현시，재분자량위43kDa처유상응조대。결론성공구건과표체Pitx3기인적만병독표체재체병건립료은정표체Pitx3기인적MES23.5세포주，차연구위진일보탐토Pitx3기인적공능제공료량호적연구공구。
