石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2014年
4期
403-408
,共6页
张丽丽%崔百明%郑银英%黄先忠%向本春
張麗麗%崔百明%鄭銀英%黃先忠%嚮本春
장려려%최백명%정은영%황선충%향본춘
HC-Pro蛋白%OPA3-like蛋白%相互作用%双分子荧光互补%洋葱表皮细胞
HC-Pro蛋白%OPA3-like蛋白%相互作用%雙分子熒光互補%洋蔥錶皮細胞
HC-Pro단백%OPA3-like단백%상호작용%쌍분자형광호보%양총표피세포
HC-Pro%OPA3-like%interaction%BiFC%onion epidermal cell
为了研究加工番茄OPA3-1ike蛋白与马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的辅助成分蛋白酶(helper component proteinase,HC-Pro)的相互作用,进行了2种蛋白的结合及其定位研究.通过PCR的方法从加工番茄中克隆OPA3-1ike 基因,同时利用Blast方法对其分析,进行了OPA3-1ike蛋白基因氨基酸序列同源性分析.通过构建双分子荧光互补载体pSPYCE-35S-OPA3-like和pSPYNE-35S-HC-Pro,利用农杆菌介导法共侵染洋葱表皮细胞60 h后,在共聚焦显微镜下观察洋葱表皮细胞中的黄色荧光.结果显示:加工番茄OPA3-like基因ORF长510 bp,编码169个氨基酸,编码蛋白属OPA3蛋白家族.激光共聚焦显微镜下可观察到沿细胞膜呈小泡状分布黄色荧光,说明PVY的HC-Pro蛋白与加工番茄OPA3-like蛋白结合并且共定位在细胞膜附近.这为进一步研究PVY的HC-Pro蛋白与加工番茄OPA3-like蛋白的相互作用机制奠定了一定的基础.
為瞭研究加工番茄OPA3-1ike蛋白與馬鈴藷Y病毒(Potato virus Y,PVY)的輔助成分蛋白酶(helper component proteinase,HC-Pro)的相互作用,進行瞭2種蛋白的結閤及其定位研究.通過PCR的方法從加工番茄中剋隆OPA3-1ike 基因,同時利用Blast方法對其分析,進行瞭OPA3-1ike蛋白基因氨基痠序列同源性分析.通過構建雙分子熒光互補載體pSPYCE-35S-OPA3-like和pSPYNE-35S-HC-Pro,利用農桿菌介導法共侵染洋蔥錶皮細胞60 h後,在共聚焦顯微鏡下觀察洋蔥錶皮細胞中的黃色熒光.結果顯示:加工番茄OPA3-like基因ORF長510 bp,編碼169箇氨基痠,編碼蛋白屬OPA3蛋白傢族.激光共聚焦顯微鏡下可觀察到沿細胞膜呈小泡狀分佈黃色熒光,說明PVY的HC-Pro蛋白與加工番茄OPA3-like蛋白結閤併且共定位在細胞膜附近.這為進一步研究PVY的HC-Pro蛋白與加工番茄OPA3-like蛋白的相互作用機製奠定瞭一定的基礎.
위료연구가공번가OPA3-1ike단백여마령서Y병독(Potato virus Y,PVY)적보조성분단백매(helper component proteinase,HC-Pro)적상호작용,진행료2충단백적결합급기정위연구.통과PCR적방법종가공번가중극륭OPA3-1ike 기인,동시이용Blast방법대기분석,진행료OPA3-1ike단백기인안기산서렬동원성분석.통과구건쌍분자형광호보재체pSPYCE-35S-OPA3-like화pSPYNE-35S-HC-Pro,이용농간균개도법공침염양총표피세포60 h후,재공취초현미경하관찰양총표피세포중적황색형광.결과현시:가공번가OPA3-like기인ORF장510 bp,편마169개안기산,편마단백속OPA3단백가족.격광공취초현미경하가관찰도연세포막정소포상분포황색형광,설명PVY적HC-Pro단백여가공번가OPA3-like단백결합병차공정위재세포막부근.저위진일보연구PVY적HC-Pro단백여가공번가OPA3-like단백적상호작용궤제전정료일정적기출.
