CAJ | 학술논문

[目的]观察脂多糖(LPS)对巨噬细胞自噬的影响及p38/MAPK通路在其中的作用.[方法]体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯LPS刺激组、LPS+P38抑制剂(SB203582)组和LPS+mTOR抑制剂(rapamycin)组.将前期构建的载体pcDNA3.1-GFP-LC3,转染RAW264.7,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况.qRT-PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ和Bnip3 mRNA表达水平的改变.利用Western blotting检测LC3-Ⅱ、p-P38、P38蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬过程中p38/MAPK通路的作用.[结果]在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组有明显增强;qRT-PCR检测到自噬相关基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ,和Bnip3 mRNA的表达在饥饿状态组、LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组有明显增强;Westernblotting检测发现p-P38在饥饿状态组、LPS组和LPS+rapamycin组中表达明显升高;LC3-Ⅱ的表达在饥饿状态组、LPS+SB203582组和LPS+rapamycin组中表达要高于对照组和LPS组.[结论]LPS参与巨噬细胞自噬的调控,除经典mTOR通路之外,p38/MAPK通路是其抑制通路之一.
[목적]관찰지다당(LPS)대거서세포자서적영향급p38/MAPK통로재기중적작용.[방법]체외배양거서세포주RAW264.7,분위대조조、기아상태격활자서조、단순LPS자격조、LPS+P38억제제(SB203582)조화LPS+mTOR억제제(rapamycin)조.장전기구건적재체pcDNA3.1-GFP-LC3,전염RAW264.7,통과형광현미경관찰각조세포중자서체형성정황.qRT-PCR방법검측각조중여세포자서상관적기인Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ화Bnip3 mRNA표체수평적개변.이용Western blotting검측LC3-Ⅱ、p-P38、P38단백재각조중적표체정황,이평개LPS격활거서세포자서과정중p38/MAPK통로적작용.[결과]재형광현미경하가이관찰도자서재기아상태조、LPS+SB203582조화LPS+rapamycin조유명현증강;qRT-PCR검측도자서상관기인Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ,화Bnip3 mRNA적표체재기아상태조、LPS+SB203582조화LPS+rapamycin조유명현증강;Westernblotting검측발현p-P38재기아상태조、LPS조화LPS+rapamycin조중표체명현승고;LC3-Ⅱ적표체재기아상태조、LPS+SB203582조화LPS+rapamycin조중표체요고우대조조화LPS조.[결론]LPS삼여거서세포자서적조공,제경전mTOR통로지외,p38/MAPK통로시기억제통로지일.