西南师范大学学报（自然科学版）
西南師範大學學報（自然科學版）
서남사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SOUTHWEST CHINA NORMAL UNIVERSITY
2014年
12期
37-42
,共6页
桂腾琴%孙敏%陆春连%刘群%代婷%柏和燕
桂騰琴%孫敏%陸春連%劉群%代婷%柏和燕
계등금%손민%륙춘련%류군%대정%백화연
梨%正交设计%ISSR体系优化
梨%正交設計%ISSR體繫優化
리%정교설계%ISSR체계우화
in pear%orthogonal design%ISSR system optimization
以‘饼子梨’为试材，利用正交设计L16（45）研究了反应体系中引物、模板DNA浓度等5个因素4个水平对梨反应体系的影响，PCR结果应用极差分析和MINITAB软件对扩增结果进行方差分析．梨最佳ISSR‐PCR反应体系：25μL反应体系中含2.5μL 10× Buffer ，2.0 mmol／L Mg2＋，0.25 mmol／L dNTPs ，0.25μmol／L引物，60 ng模板DNA ，0.75 U Taq DNA聚合酶．优化的ISSR‐PCR反应体系稳定性高和重复性较好，为梨品种指纹图谱构建和遗传多样性分析奠定基础．
以‘餅子梨’為試材，利用正交設計L16（45）研究瞭反應體繫中引物、模闆DNA濃度等5箇因素4箇水平對梨反應體繫的影響，PCR結果應用極差分析和MINITAB軟件對擴增結果進行方差分析．梨最佳ISSR‐PCR反應體繫：25μL反應體繫中含2.5μL 10× Buffer ，2.0 mmol／L Mg2＋，0.25 mmol／L dNTPs ，0.25μmol／L引物，60 ng模闆DNA ，0.75 U Taq DNA聚閤酶．優化的ISSR‐PCR反應體繫穩定性高和重複性較好，為梨品種指紋圖譜構建和遺傳多樣性分析奠定基礎．
이‘병자리’위시재，이용정교설계L16（45）연구료반응체계중인물、모판DNA농도등5개인소4개수평대리반응체계적영향，PCR결과응용겁차분석화MINITAB연건대확증결과진행방차분석．리최가ISSR‐PCR반응체계：25μL반응체계중함2.5μL 10× Buffer ，2.0 mmol／L Mg2＋，0.25 mmol／L dNTPs ，0.25μmol／L인물，60 ng모판DNA ，0.75 U Taq DNA취합매．우화적ISSR‐PCR반응체계은정성고화중복성교호，위리품충지문도보구건화유전다양성분석전정기출．
Orthogonal design has been applied to optimize ISSR‐PCR amplification system of in pear in five factors such as primer ,dNTPs ,template DNA ,Taq DNA polymerase and Mg2+ at four levels .The result of PCR has been analyzed by range analysis and variance analysis .An optimal reaction system (25μL) has been established ,i .e .2 .5 μL 10 × Buffer ,2 .0 mmol/L M g2+ ,0 .25 mmol/L dN T Ps ,0 .25 μmol/L prim‐er ,60 ng template DNA ,0 .75 U Taq DNA polymerase .The results indicate that the optimized reaction system was stable and repeatable .The objective of the study is to provide a scientific basis for the con‐structing DNA fingerprints and genetic diversity analysis of in pear .
