口腔生物医学
口腔生物醫學
구강생물의학
ORAL BIOMEDICINE
2014年
4期
169-173
,共5页
戈杰%张娟%郭松松%傅瑜%江宏兵
戈傑%張娟%郭鬆鬆%傅瑜%江宏兵
과걸%장연%곽송송%부유%강굉병
颅骨锁骨发育不全%牙囊细胞%增殖%成骨%破骨
顱骨鎖骨髮育不全%牙囊細胞%增殖%成骨%破骨
로골쇄골발육불전%아낭세포%증식%성골%파골
Cleidocranial dysplasia%Dental follicle cells%Cell proliferation%Osteogenesis%Osteoclastogenesis
目的：在成功分离培养正常同龄人牙囊细胞（dental follicle cells，DFCs）与颅骨锁骨发育不全（cleidocranial dysplasia， CCD）患者牙囊细胞（DFCs-CCD）的基础上，研究其一般体外生物学特征，包括增殖、克隆、成骨及破骨能力。方法：采用 BrdU细胞增殖实验与倍增法研究两种来源 DFCs 增殖能力；用结晶紫染液染色培养12 d 的两种 DFCs，分析其克隆形成能力；并用成骨诱导液诱导两种 DFCs 成骨，用 Western blot 和茜素红染色法分析成骨能力，用实时定量 PCR 方法研究其破骨基因表达差异。结果：DFCs-CCD 的 BrdU 阳性率高于 DFCs，同时 DFCs 的群体倍增时间为（1．834±0．093）d，而 DFCs-CCD 的则为（1．394±0．028）d，差异具有统计学意义（P ＜0．05）；DFCs-CCD 的克隆集落多于 DFCs，但 Runt 相关转录因子2（Runt-related transcrip-tion factor 2，Runx2）、成骨细胞特异性转录因子 Osterix、骨钙素（osteocalcin，Ocn）等成骨相关蛋白表达水平低，而其茜素红染色所示钙化结节同样较少；同时，DFCs-CCD 高表达核因子-κB 受体活化因子（receptor activator for nuclear factor-κB，RANK）和骨保护素（osteoprotegerin，OPG）等破骨相关基因（P ＜0．05），而核因子-κB 受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）水平无统计学差异（P ＞0．05）。结论：相比 DFCs，DFCs-CCD 具有更强的增殖、克隆能力和更弱的成骨能力，而破骨基因表达紊乱。
目的：在成功分離培養正常同齡人牙囊細胞（dental follicle cells，DFCs）與顱骨鎖骨髮育不全（cleidocranial dysplasia， CCD）患者牙囊細胞（DFCs-CCD）的基礎上，研究其一般體外生物學特徵，包括增殖、剋隆、成骨及破骨能力。方法：採用 BrdU細胞增殖實驗與倍增法研究兩種來源 DFCs 增殖能力；用結晶紫染液染色培養12 d 的兩種 DFCs，分析其剋隆形成能力；併用成骨誘導液誘導兩種 DFCs 成骨，用 Western blot 和茜素紅染色法分析成骨能力，用實時定量 PCR 方法研究其破骨基因錶達差異。結果：DFCs-CCD 的 BrdU 暘性率高于 DFCs，同時 DFCs 的群體倍增時間為（1．834±0．093）d，而 DFCs-CCD 的則為（1．394±0．028）d，差異具有統計學意義（P ＜0．05）；DFCs-CCD 的剋隆集落多于 DFCs，但 Runt 相關轉錄因子2（Runt-related transcrip-tion factor 2，Runx2）、成骨細胞特異性轉錄因子 Osterix、骨鈣素（osteocalcin，Ocn）等成骨相關蛋白錶達水平低，而其茜素紅染色所示鈣化結節同樣較少；同時，DFCs-CCD 高錶達覈因子-κB 受體活化因子（receptor activator for nuclear factor-κB，RANK）和骨保護素（osteoprotegerin，OPG）等破骨相關基因（P ＜0．05），而覈因子-κB 受體活化因子配體（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）水平無統計學差異（P ＞0．05）。結論：相比 DFCs，DFCs-CCD 具有更彊的增殖、剋隆能力和更弱的成骨能力，而破骨基因錶達紊亂。
목적：재성공분리배양정상동령인아낭세포（dental follicle cells，DFCs）여로골쇄골발육불전（cleidocranial dysplasia， CCD）환자아낭세포（DFCs-CCD）적기출상，연구기일반체외생물학특정，포괄증식、극륭、성골급파골능력。방법：채용 BrdU세포증식실험여배증법연구량충래원 DFCs 증식능력；용결정자염액염색배양12 d 적량충 DFCs，분석기극륭형성능력；병용성골유도액유도량충 DFCs 성골，용 Western blot 화천소홍염색법분석성골능력，용실시정량 PCR 방법연구기파골기인표체차이。결과：DFCs-CCD 적 BrdU 양성솔고우 DFCs，동시 DFCs 적군체배증시간위（1．834±0．093）d，이 DFCs-CCD 적칙위（1．394±0．028）d，차이구유통계학의의（P ＜0．05）；DFCs-CCD 적극륭집락다우 DFCs，단 Runt 상관전록인자2（Runt-related transcrip-tion factor 2，Runx2）、성골세포특이성전록인자 Osterix、골개소（osteocalcin，Ocn）등성골상관단백표체수평저，이기천소홍염색소시개화결절동양교소；동시，DFCs-CCD 고표체핵인자-κB 수체활화인자（receptor activator for nuclear factor-κB，RANK）화골보호소（osteoprotegerin，OPG）등파골상관기인（P ＜0．05），이핵인자-κB 수체활화인자배체（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）수평무통계학차이（P ＞0．05）。결론：상비 DFCs，DFCs-CCD 구유경강적증식、극륭능력화경약적성골능력，이파골기인표체문란。
Objective:To study the invitro biologic characteristics of dental follicle cells with cleidocranial dysplasia (DFCs-CCD) including proliferation ability,clone-forming efficiency,osteogenesis and osteoclastogenesis abilities.Methods:Brdu cell proliferation and population doubling time assays for cell proliferationo ability,crystal violet staining with cells cultured for 12 days for clone-forming efficiency,Western blot and alizarin red staining for osteogenesis ability and real-time PCR for osteoclastogenesis ability.Results:DF-Cs-CCD gave higher BrdU positive results.The population doubling time was (1 .834 ±0.093)d of DFCs and (1 .394 ±0.028)d of DFCs-CCD (P <0.05).DFCs-CCD presented more clones and weaker expression of Runx2,Osrerix,Ocn and alizarin red staining. DFCs-CCD also expressed stronger levels of OPG and RANK,but no statistical difference of RANKL(P >0.05).Conclusions:DFCs-CCD exhibited stronger cell proliferation and clone-forming abilities,weaker osteogenesis and disorganized osteoclastogenesis abilities.
