CAJ | 학술논문

为研究牛细小病毒(BPV)VP2衣壳蛋白自组装病毒样颗粒(VLPs)以及VLPs的免疫原性.本研究以BPV-1型C7-5中国分离株的基因组序列为模板扩增VP2蛋白的编码基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用E.coliB J5183内同源重组将VP2基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带BPVVP2基因的重组腺病毒质粒(pAd-BPV-VP2).该重组质粒经Pac Ⅰ线性化后转染Ad293细胞,获得重组腺病毒rAd-BPV-VP2,第8代时滴度为107.25 TCID50/mL.间接免疫荧光、westemblot以及电镜观察结果显示,BPV VP2蛋白可以在腺病毒系统中稳定表达,并有效组装VLPs.将rAd-BPV-VP2肌肉注射免疫BALB/c小鼠,结果显示,针对BPV的血清IgG和中和(VN)抗体分别于加强免疫后2周和8周达最高水平,高峰抗体可持续至15周,VN抗体的最高滴度可达1:4 000.此外,与对照小鼠血清相比,免疫小鼠血清中的IL-2、IL-4及IFN-γ含量显著升高(p＜0.05).结果表明,rAd-BPV-VP2免疫小鼠后可以诱导机体产生针对BPV的特异性体液和细胞免疫.本研究为BPV的免疫预防及载体的开发奠定了基础.
위연구우세소병독(BPV)VP2의각단백자조장병독양과립(VLPs)이급VLPs적면역원성.본연구이BPV-1형C7-5중국분리주적기인조서렬위모판확증VP2단백적편마기인,장기극륭지선병독천사재체pShuttle-CMV중,이용E.coliB J5183내동원중조장VP2기인삽입선병독골가질립pAdEasy-1중,획득휴대BPVVP2기인적중조선병독질립(pAd-BPV-VP2).해중조질립경Pac Ⅰ선성화후전염Ad293세포,획득중조선병독rAd-BPV-VP2,제8대시적도위107.25 TCID50/mL.간접면역형광、westemblot이급전경관찰결과현시,BPV VP2단백가이재선병독계통중은정표체,병유효조장VLPs.장rAd-BPV-VP2기육주사면역BALB/c소서,결과현시,침대BPV적혈청IgG화중화(VN)항체분별우가강면역후2주화8주체최고수평,고봉항체가지속지15주,VN항체적최고적도가체1:4 000.차외,여대조소서혈청상비,면역소서혈청중적IL-2、IL-4급IFN-γ함량현저승고(p＜0.05).결과표명,rAd-BPV-VP2면역소서후가이유도궤체산생침대BPV적특이성체액화세포면역.본연구위BPV적면역예방급재체적개발전정료기출.