中国全科医学
中國全科醫學
중국전과의학
CHINESE GENERAL PRACTICE
2015年
2期
176-179
,共4页
白假丝酵母菌%RNA%聚合酶链反应%溶壁酶
白假絲酵母菌%RNA%聚閤酶鏈反應%溶壁酶
백가사효모균%RNA%취합매련반응%용벽매
Candida albicans%RNA%Polymerase chain reaction%Lyticase
目的：探索白假丝酵母菌总 RNA 简单、快捷、高效的提取方法。方法选取昆明医科大学第一附属医院妇产科门诊2011年7月—2013年3月有临床症状且阴道分泌物镜检阳性的外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）患者的白假丝酵母菌40株，选用不同时间与温度组合下的4种溶壁酶（Lyticase）破壁方案（A 方案：37℃、12 h，B 方案：25℃、12 h，C 方案：37℃、24 h，D 方案：25℃、24 h）进行 RNA 提取，将所得 RNA 进行荧光定量 PCR（qPCR）反应验证 RNA 的浓度及纯度，并进行管家基因18S rRNA 的检测。结果 D 方案提取获得的 RNA 浓度高于 A、B、C 方案（P ＜0.05）；B 方案提取获得的 RNA 浓度高于 A、C 方案（P ＜0.05）；而 A、C 两方案提取获得的 RNA 浓度比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。B、D 方案获得的 RNA 纯度高于 A、C 方案（P ＜0.05）；但 A、C 方案获得的 RNA 纯度比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；B 方案提取获得的 RNA 纯度高于 D 方案（P ＜0.05）。A、B、C、D 方案提取的 RNA 扩增产物 Ct 转化值比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）；其中 B、D 方案 qPCR 扩增产物 Ct 转化值高于 A、C方案（P ＜0.05）；但 B、D 方案及 A、C 方案之间的 qPCR 扩增产物 Ct 转化值比较，差异无统计学意义（ P ＞0.05）。管家基因18S rRNA 的引物扩增出的产物片段大小为150 bp。结论以 Lyticase 破壁提取白假丝酵母菌具有简单易行及RNA 产量高、纯度好的优点，值得临床推广应用。
目的：探索白假絲酵母菌總 RNA 簡單、快捷、高效的提取方法。方法選取昆明醫科大學第一附屬醫院婦產科門診2011年7月—2013年3月有臨床癥狀且陰道分泌物鏡檢暘性的外陰陰道假絲酵母菌病（VVC）患者的白假絲酵母菌40株，選用不同時間與溫度組閤下的4種溶壁酶（Lyticase）破壁方案（A 方案：37℃、12 h，B 方案：25℃、12 h，C 方案：37℃、24 h，D 方案：25℃、24 h）進行 RNA 提取，將所得 RNA 進行熒光定量 PCR（qPCR）反應驗證 RNA 的濃度及純度，併進行管傢基因18S rRNA 的檢測。結果 D 方案提取穫得的 RNA 濃度高于 A、B、C 方案（P ＜0.05）；B 方案提取穫得的 RNA 濃度高于 A、C 方案（P ＜0.05）；而 A、C 兩方案提取穫得的 RNA 濃度比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）。B、D 方案穫得的 RNA 純度高于 A、C 方案（P ＜0.05）；但 A、C 方案穫得的 RNA 純度比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）；B 方案提取穫得的 RNA 純度高于 D 方案（P ＜0.05）。A、B、C、D 方案提取的 RNA 擴增產物 Ct 轉化值比較，差異有統計學意義（P ＜0.05）；其中 B、D 方案 qPCR 擴增產物 Ct 轉化值高于 A、C方案（P ＜0.05）；但 B、D 方案及 A、C 方案之間的 qPCR 擴增產物 Ct 轉化值比較，差異無統計學意義（ P ＞0.05）。管傢基因18S rRNA 的引物擴增齣的產物片段大小為150 bp。結論以 Lyticase 破壁提取白假絲酵母菌具有簡單易行及RNA 產量高、純度好的優點，值得臨床推廣應用。
목적：탐색백가사효모균총 RNA 간단、쾌첩、고효적제취방법。방법선취곤명의과대학제일부속의원부산과문진2011년7월—2013년3월유림상증상차음도분비물경검양성적외음음도가사효모균병（VVC）환자적백가사효모균40주，선용불동시간여온도조합하적4충용벽매（Lyticase）파벽방안（A 방안：37℃、12 h，B 방안：25℃、12 h，C 방안：37℃、24 h，D 방안：25℃、24 h）진행 RNA 제취，장소득 RNA 진행형광정량 PCR（qPCR）반응험증 RNA 적농도급순도，병진행관가기인18S rRNA 적검측。결과 D 방안제취획득적 RNA 농도고우 A、B、C 방안（P ＜0.05）；B 방안제취획득적 RNA 농도고우 A、C 방안（P ＜0.05）；이 A、C 량방안제취획득적 RNA 농도비교，차이무통계학의의（P ＞0.05）。B、D 방안획득적 RNA 순도고우 A、C 방안（P ＜0.05）；단 A、C 방안획득적 RNA 순도비교，차이무통계학의의（P ＞0.05）；B 방안제취획득적 RNA 순도고우 D 방안（P ＜0.05）。A、B、C、D 방안제취적 RNA 확증산물 Ct 전화치비교，차이유통계학의의（P ＜0.05）；기중 B、D 방안 qPCR 확증산물 Ct 전화치고우 A、C방안（P ＜0.05）；단 B、D 방안급 A、C 방안지간적 qPCR 확증산물 Ct 전화치비교，차이무통계학의의（ P ＞0.05）。관가기인18S rRNA 적인물확증출적산물편단대소위150 bp。결론이 Lyticase 파벽제취백가사효모균구유간단역행급RNA 산량고、순도호적우점，치득림상추엄응용。
Objective To explore a simple,rapid and effective solution of extracting RNA from Candida albicans (C. albicans). Methods From july 2011 to March 2013,in the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University,40 isolates simulated from vaginal secretion were identified as C. albicans. This study chose 4 Lyticase disrupting - wall programs at different time and temperatures(program A:37 ℃ ,12 h;program B:25 ℃ ,12 h;program C:37 ℃ ,24 h;program D:25 ℃ ,24 h) to extract RNA. The concentrations and purity of the extracted RNA were verified by real - time fluorescent quantitative PCR(qPCR)reaction and housekeeping gene 18S rRNA detection performed. Results The RNA concentration of program D was higher than those of programs A,B,C,the difference was significant( P < 0. 05),that of program B was higher than those of programs A,C(P < 0. 05),but there was no difference between programs A,C(P > 0. 05). The RNA purity programs B,D was higher than those of programs A,C(P < 0. 05),but there was no difference between programs A,C (P > 0. 05). RNA purity of program B was higher than that of program D(P < 0. 05). There was difference in RNA amplified product Ct conversion value in programs A,B,C,D(P < 0. 05),there into the qPCR amplified product Ct conversion value of programs B,D was higher than that of programs A,C(P < 0. 05),but there was no difference between programs B,D and A,C(P > 0. 05). The product fragment size amplified by housekeeping gene 18S rRNA primers was 150 bp. Conclusion Lyticase wall - disruption extacting C. albicans is simple,easy to operate,with high RNA products and good purity,which is worthy of promotion.
