CAJ | 학술논문

目的：体外研究阿司匹林和氯吡格雷对血小板黏附内皮细胞基质活性的影响及其机制，从理论上寻找两种药物联合效果优于单药的原因。方法于2013年在第三军医大学动物中心购买健康雌性 SD 大鼠42只，采用随机数字表法，将 SD 大鼠分为阿司匹林组（8只）、氯吡格雷组（8只）、阿司匹林联合氯吡格雷组（联合组，8只）、对照组（8只）以及用于原代细胞分离培养10只。分离培养原代大鼠血管内皮细胞，利用50μg/ ml 氧化修饰低密度脂蛋白（ox - LDL）建立受损血管内皮细胞模型并采用100 mg/ kg 阿司匹林、10 mg/ kg 氯吡格雷、100 mg/ kg 阿司匹林联合10 mg/ kg 氯吡格雷以及200μl 蓖麻油制作内皮细胞基质板；血浆血小板分离制备前3 d，阿司匹林组喂养阿司匹林100 mg·kg -1·d -1，氯吡格雷组喂养氯吡格雷10 mg·kg -1·d -1，联合组喂养阿司匹林100 mg·kg -1·d -1，氯吡格雷10 mg·kg -1·d -1，对照组喂养蓖麻油200μl/ d。采用 ELISA 法检测黏附内皮细胞基质上的血小板数量；采用蛋白质免疫印迹法检测阿司匹林和氯吡格雷对血管内皮细胞蛋白血栓调节蛋白（ TM）、氧化型低密度脂蛋白受体1（LOX -1）、CD40表达的影响。结果经阿司匹林和氯吡格雷处理的血小板对内皮细胞黏附活性的影响：4组50、100、150、200μl血小板黏附内皮细胞基质活性比较，差异均有统计学意义（P ﹤0.05），其中氯吡格雷组和联合组50、100、150、200μl 血小板黏附内皮细胞基质活性均低于对照组和阿司匹林组，阿司匹林组150μl 血小板黏附内皮细胞基质活性低于对照组（P ﹤0.05）。血小板黏附经阿司匹林和氯吡格雷处理的内皮细胞基质活性的影响：4组50、100、150、200μl 血小板黏附内皮细胞基质活性比较，差异均有统计学意义（P ﹤0.05），其中联合组50、100、150、200μl 血小板黏附内皮细胞基质活性分别低于对照组、阿司匹林组和氯吡格雷组（P ﹤0.05）。蛋白质免疫印迹法显示，阿司匹林和氯吡格雷均能抑制由 ox - LDL 引起的 TM 表达的减少。ox - LDL 能明显诱导血管内皮细胞 LOX -1表达，阿司匹林能明显抑制由 ox - LDL 引起的 LOX -1和 IL -6的表达；而氯吡格雷则能明显抑制内皮细胞 CD40的表达。结论阿司匹林和氯吡格雷均能从上调 TM 和抑制炎性因子两方面降低血小板对内皮细胞基质的黏附作用。但两者联合更能抑制由 ox - LDL引起的炎性因子的表达，降低血小板对内皮细胞基质的黏附。目的：體外研究阿司匹林和氯吡格雷對血小闆黏附內皮細胞基質活性的影響及其機製，從理論上尋找兩種藥物聯閤效果優于單藥的原因。方法于2013年在第三軍醫大學動物中心購買健康雌性 SD 大鼠42隻，採用隨機數字錶法，將 SD 大鼠分為阿司匹林組（8隻）、氯吡格雷組（8隻）、阿司匹林聯閤氯吡格雷組（聯閤組，8隻）、對照組（8隻）以及用于原代細胞分離培養10隻。分離培養原代大鼠血管內皮細胞，利用50μg/ ml 氧化脩飾低密度脂蛋白（ox - LDL）建立受損血管內皮細胞模型併採用100 mg/ kg 阿司匹林、10 mg/ kg 氯吡格雷、100 mg/ kg 阿司匹林聯閤10 mg/ kg 氯吡格雷以及200μl 蓖痳油製作內皮細胞基質闆；血漿血小闆分離製備前3 d，阿司匹林組餵養阿司匹林100 mg·kg -1·d -1，氯吡格雷組餵養氯吡格雷10 mg·kg -1·d -1，聯閤組餵養阿司匹林100 mg·kg -1·d -1，氯吡格雷10 mg·kg -1·d -1，對照組餵養蓖痳油200μl/ d。採用 ELISA 法檢測黏附內皮細胞基質上的血小闆數量；採用蛋白質免疫印跡法檢測阿司匹林和氯吡格雷對血管內皮細胞蛋白血栓調節蛋白（ TM）、氧化型低密度脂蛋白受體1（LOX -1）、CD40錶達的影響。結果經阿司匹林和氯吡格雷處理的血小闆對內皮細胞黏附活性的影響：4組50、100、150、200μl血小闆黏附內皮細胞基質活性比較，差異均有統計學意義（P ﹤0.05），其中氯吡格雷組和聯閤組50、100、150、200μl 血小闆黏附內皮細胞基質活性均低于對照組和阿司匹林組，阿司匹林組150μl 血小闆黏附內皮細胞基質活性低于對照組（P ﹤0.05）。血小闆黏附經阿司匹林和氯吡格雷處理的內皮細胞基質活性的影響：4組50、100、150、200μl 血小闆黏附內皮細胞基質活性比較，差異均有統計學意義（P ﹤0.05），其中聯閤組50、100、150、200μl 血小闆黏附內皮細胞基質活性分彆低于對照組、阿司匹林組和氯吡格雷組（P ﹤0.05）。蛋白質免疫印跡法顯示，阿司匹林和氯吡格雷均能抑製由 ox - LDL 引起的 TM 錶達的減少。ox - LDL 能明顯誘導血管內皮細胞 LOX -1錶達，阿司匹林能明顯抑製由 ox - LDL 引起的 LOX -1和 IL -6的錶達；而氯吡格雷則能明顯抑製內皮細胞 CD40的錶達。結論阿司匹林和氯吡格雷均能從上調 TM 和抑製炎性因子兩方麵降低血小闆對內皮細胞基質的黏附作用。但兩者聯閤更能抑製由 ox - LDL引起的炎性因子的錶達，降低血小闆對內皮細胞基質的黏附。
목적：체외연구아사필림화록필격뢰대혈소판점부내피세포기질활성적영향급기궤제，종이론상심조량충약물연합효과우우단약적원인。방법우2013년재제삼군의대학동물중심구매건강자성 SD 대서42지，채용수궤수자표법，장 SD 대서분위아사필림조（8지）、록필격뢰조（8지）、아사필림연합록필격뢰조（연합조，8지）、대조조（8지）이급용우원대세포분리배양10지。분리배양원대대서혈관내피세포，이용50μg/ ml 양화수식저밀도지단백（ox - LDL）건립수손혈관내피세포모형병채용100 mg/ kg 아사필림、10 mg/ kg 록필격뢰、100 mg/ kg 아사필림연합10 mg/ kg 록필격뢰이급200μl 비마유제작내피세포기질판；혈장혈소판분리제비전3 d，아사필림조위양아사필림100 mg·kg -1·d -1，록필격뢰조위양록필격뢰10 mg·kg -1·d -1，연합조위양아사필림100 mg·kg -1·d -1，록필격뢰10 mg·kg -1·d -1，대조조위양비마유200μl/ d。채용 ELISA 법검측점부내피세포기질상적혈소판수량；채용단백질면역인적법검측아사필림화록필격뢰대혈관내피세포단백혈전조절단백（ TM）、양화형저밀도지단백수체1（LOX -1）、CD40표체적영향。결과경아사필림화록필격뢰처리적혈소판대내피세포점부활성적영향：4조50、100、150、200μl혈소판점부내피세포기질활성비교，차이균유통계학의의（P ﹤0.05），기중록필격뢰조화연합조50、100、150、200μl 혈소판점부내피세포기질활성균저우대조조화아사필림조，아사필림조150μl 혈소판점부내피세포기질활성저우대조조（P ﹤0.05）。혈소판점부경아사필림화록필격뢰처리적내피세포기질활성적영향：4조50、100、150、200μl 혈소판점부내피세포기질활성비교，차이균유통계학의의（P ﹤0.05），기중연합조50、100、150、200μl 혈소판점부내피세포기질활성분별저우대조조、아사필림조화록필격뢰조（P ﹤0.05）。단백질면역인적법현시，아사필림화록필격뢰균능억제유 ox - LDL 인기적 TM 표체적감소。ox - LDL 능명현유도혈관내피세포 LOX -1표체，아사필림능명현억제유 ox - LDL 인기적 LOX -1화 IL -6적표체；이록필격뢰칙능명현억제내피세포 CD40적표체。결론아사필림화록필격뢰균능종상조 TM 화억제염성인자량방면강저혈소판대내피세포기질적점부작용。단량자연합경능억제유 ox - LDL인기적염성인자적표체，강저혈소판대내피세포기질적점부。
Objective To study the effects of aspirin and clopidogrel on the adhesion activity of platelet to endothelial cell matrix in vitro and its mechanism, and to find the reasons why combination use of two drugs is better than monotherapy. Methods A total of 42 healthy female SD rats were bought from the animal centre of Third Military Medical University. By using random number table method,SD rats were divided into aspirin group(8 rats),clopidogrel group(8 rats),aspirin and clopidogrel(combination)group(8 rats),control group(8 rats),the other 10 rats were used for primary isolation and culture of cells. The isolated and cultured primary rat vascular endothelial cells were treated with ox - LDL to establish damaged vascular endothelial cell model. 100 mg/ kg aspirin,10 mg/ kg clopidogrel,combination of 100 mg/ kg aspirin and 10 mg/ kg clopidogrel,and 200 μl castor oil were used respectively to prepare endothelial cell matrix plate. 3 days before the separation and preparation of platelet from plasma,rats in aspirin group were fed with 100 mg·kg - 1 ·d - 1 aspirin,rats in clopidogrel group were fed with 10 mg·kg - 1 ·d - 1 clopidogrel,rats in aspirin and clopidogrel group were fed with 100 mg·kg - 1 ·d - 1 aspirin and 10 mg·kg - 1 ·d - 1 clopidogrel,rats in control group were fed with castor oil 200 μl per day. ELISA assay was used to evaluate the amount of platelets which adhered to the endothelial matrix. Western blotting technology was used to evaluate the effects of aspirin and clopidogrel on expression of thrombomodulin(TM),lectin like oxidized low density lipoprotein receptor- 1(LOX - 1)and CD40 in vascular endothelial cells. Results The adhesion activity of aspirin/ clopidogrel - treated platelet to endothelial cell matrix:there were significant differences in adhesion activity of aspirin/ clopidogrel - treated(50,100,150, 200 μl)platelet to endothelial cell matrix among 4 groups(P ﹤ 0. 05),adhesion activity of aspirin/ clopidogrel - treated platelet to endothelial cell matrix in clopidogrel group and combination group was significantly lower than that in control group and aspirin group,respectively,adhesion activity of aspirin/ clopidogrel - treated(150 μl) platelet to endothelial cell matrix in aspirin group was significantly lower than that in control group(P ﹤ 0. 05). The adhesion activity of platelet to aspirin/ clopidogrel -treated endothelial cell matrix:there were significant differences in adhesion activity of platelet to aspirin/ clopidogrel - treated (50,100,150,200 μl) endothelial cell matrix among 4 groups( P ﹤ 0. 05 ),adhesion activity of platelet to aspirin/clopidogrel - treated(50,100,150,200 μl)endothelial cell matrix in combination group was significantly lower than that in control group,aspirin group,clopidogrel group,respectively(P ﹤ 0. 05). According to western blotting results,both aspirin and clopidogrel could inhibit ox - LDL - induced decreasing expression of TM. Ox - LDL could induce LOX - 1 expression in vascular endothelial cells,aspirin could inhibit ox - LDL - induced expression of LOX - 1 and IL - 6 obviously,clopidogrel could inhibit CD40 expression in endothelial cells obviously. Conclusion Both aspirin and clopidogrel can reduce adhesion activity of platelet to endothelial cell matrix through increasing TM level and inhibiting inflammatory factors. The combination use of the two drugs can inhibit ox - LDL - induced expression of inflammatory cytokines obviously,and reduce the adhension of platelet to endothelial cell matrix.