东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2014年
6期
752-755
,共4页
Raf激酶抑制蛋白%表达%纯化%细胞迁移
Raf激酶抑製蛋白%錶達%純化%細胞遷移
Raf격매억제단백%표체%순화%세포천이
Raf kinase inhibitor protein%expression%purification%metastasis
目的:研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在细胞外对肿瘤细胞迁移的影响.方法:通过PCR扩增得到RKIP基因片段,使用BamH I和HindⅢ双酶切并回收,然后插入双酶切过的原核表达载体pET28a(+),得到pET28a-RKIP重组质粒.将重组质粒转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达,表达产物经Ni+金属螯合层析纯化得到His-RKIP重组蛋白.通过伤口愈合实验,观察不同浓度的重组RKIP在细胞外对肿瘤细胞迁移的影响.结果:重组RKIP获得了高效表达和分离纯化,伤口愈合实验表明,在低浓度重组RKIP作用下A549肿瘤细胞迁移速度增加,在高浓度下肿瘤细胞迁移速度降低.结论:重组RKIP在细胞外具有促进和抑制A549肿瘤细胞迁移的双重作用,具体表现为低浓度时促进A549肿瘤细胞迁移,高浓度时抑制A549肿瘤细胞迁移.
目的:研究Raf激酶抑製蛋白(RKIP)在細胞外對腫瘤細胞遷移的影響.方法:通過PCR擴增得到RKIP基因片段,使用BamH I和HindⅢ雙酶切併迴收,然後插入雙酶切過的原覈錶達載體pET28a(+),得到pET28a-RKIP重組質粒.將重組質粒轉化錶達菌株BL21(DE3),經IPTG誘導錶達,錶達產物經Ni+金屬螯閤層析純化得到His-RKIP重組蛋白.通過傷口愈閤實驗,觀察不同濃度的重組RKIP在細胞外對腫瘤細胞遷移的影響.結果:重組RKIP穫得瞭高效錶達和分離純化,傷口愈閤實驗錶明,在低濃度重組RKIP作用下A549腫瘤細胞遷移速度增加,在高濃度下腫瘤細胞遷移速度降低.結論:重組RKIP在細胞外具有促進和抑製A549腫瘤細胞遷移的雙重作用,具體錶現為低濃度時促進A549腫瘤細胞遷移,高濃度時抑製A549腫瘤細胞遷移.
목적:연구Raf격매억제단백(RKIP)재세포외대종류세포천이적영향.방법:통과PCR확증득도RKIP기인편단,사용BamH I화HindⅢ쌍매절병회수,연후삽입쌍매절과적원핵표체재체pET28a(+),득도pET28a-RKIP중조질립.장중조질립전화표체균주BL21(DE3),경IPTG유도표체,표체산물경Ni+금속오합층석순화득도His-RKIP중조단백.통과상구유합실험,관찰불동농도적중조RKIP재세포외대종류세포천이적영향.결과:중조RKIP획득료고효표체화분리순화,상구유합실험표명,재저농도중조RKIP작용하A549종류세포천이속도증가,재고농도하종류세포천이속도강저.결론:중조RKIP재세포외구유촉진화억제A549종류세포천이적쌍중작용,구체표현위저농도시촉진A549종류세포천이,고농도시억제A549종류세포천이.
