食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2014年
12期
1246-1250
,共5页
陈凤祥%关波%陈蕴%段作营%金坚%李华钟
陳鳳祥%關波%陳蘊%段作營%金堅%李華鐘
진봉상%관파%진온%단작영%금견%리화종
蛋白质折叠辅助因子%融合蛋白质IFNβ-HSA%毕赤酵母%内质网氧化还原酶%二硫键异构酶%分子伴侣BiP
蛋白質摺疊輔助因子%融閤蛋白質IFNβ-HSA%畢赤酵母%內質網氧化還原酶%二硫鍵異構酶%分子伴侶BiP
단백질절첩보조인자%융합단백질IFNβ-HSA%필적효모%내질망양화환원매%이류건이구매%분자반려BiP
protein folding factor%IFNβ-HSA%Pichia pastoris%Ero1%PDI%BiP
探索共表达蛋白质折叠辅助因子Ero1、PDI和BiP对毕赤酵母GS115分泌表达融合蛋白质IFNβ-HSA的影响.将构建的蛋白质折叠辅助因子表达载体pGAP-Ero1、pGAP-PDI、pGAP-BiP和空载对照线性化后,电击转化重组毕赤酵母GS115/IFNβ-HSA细胞,用含有400 μg/mLzeocin的YPD平板筛选阳性转化子,并采用PCR和Western blot法进一步鉴定.阳性转化子进行摇瓶发酵后,采用SDS-PAGE及Western blot法分析共表达Ero1、PDI和BiP对IFNβ-HSA表达水平的影响.结果表明,Ero1、PDI和BiP成功地在胞内过量表达,且不影响宿主细胞的正常生长;共表达Ero1和PDI分别使IFNβ-HSA的表达量提高了80％和90％,而共表达BiP则对IFNβ-HSA的表达水平无明显影响.
探索共錶達蛋白質摺疊輔助因子Ero1、PDI和BiP對畢赤酵母GS115分泌錶達融閤蛋白質IFNβ-HSA的影響.將構建的蛋白質摺疊輔助因子錶達載體pGAP-Ero1、pGAP-PDI、pGAP-BiP和空載對照線性化後,電擊轉化重組畢赤酵母GS115/IFNβ-HSA細胞,用含有400 μg/mLzeocin的YPD平闆篩選暘性轉化子,併採用PCR和Western blot法進一步鑒定.暘性轉化子進行搖瓶髮酵後,採用SDS-PAGE及Western blot法分析共錶達Ero1、PDI和BiP對IFNβ-HSA錶達水平的影響.結果錶明,Ero1、PDI和BiP成功地在胞內過量錶達,且不影響宿主細胞的正常生長;共錶達Ero1和PDI分彆使IFNβ-HSA的錶達量提高瞭80％和90％,而共錶達BiP則對IFNβ-HSA的錶達水平無明顯影響.
탐색공표체단백질절첩보조인자Ero1、PDI화BiP대필적효모GS115분비표체융합단백질IFNβ-HSA적영향.장구건적단백질절첩보조인자표체재체pGAP-Ero1、pGAP-PDI、pGAP-BiP화공재대조선성화후,전격전화중조필적효모GS115/IFNβ-HSA세포,용함유400 μg/mLzeocin적YPD평판사선양성전화자,병채용PCR화Western blot법진일보감정.양성전화자진행요병발효후,채용SDS-PAGE급Western blot법분석공표체Ero1、PDI화BiP대IFNβ-HSA표체수평적영향.결과표명,Ero1、PDI화BiP성공지재포내과량표체,차불영향숙주세포적정상생장;공표체Ero1화PDI분별사IFNβ-HSA적표체량제고료80％화90％,이공표체BiP칙대IFNβ-HSA적표체수평무명현영향.
