中国脊柱脊髓杂志
中國脊柱脊髓雜誌
중국척주척수잡지
CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD
2014年
11期
1013-1019
,共7页
邝磊%吕国华%王冰%李磊%戴瑜亮%陈宇乔
鄺磊%呂國華%王冰%李磊%戴瑜亮%陳宇喬
광뢰%려국화%왕빙%리뢰%대유량%진우교
脊索瘤%microRNA%RNA编辑%RNA腺苷脱氨酶
脊索瘤%microRNA%RNA編輯%RNA腺苷脫氨酶
척색류%microRNA%RNA편집%RNA선감탈안매
Chordoma%MicroRNA%RNA editing%Adenosine deaminase acting on RNA
目的:检测脊索瘤组织中microRNA (miRNA)的差异性表达情况,探讨其RNA编辑.方法:使用RT-qPCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)技术检测骶骨脊索瘤组织1 1种候选miRNA的表达水平,将其与髓核组织中的表达水平进行比较,对表达异常的miRNA前体(pri-miRNAs)的DNA和cDNA序列进行对比,检测是否存在RNA编辑.使用蛋白印迹法(Western blot)检测脊索瘤组织中RNA编辑的关键酶RNA腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADARs)的表达.构建ADAR的表达载体,同时构建ERBB2和HOXA1的3'-非翻译区报告载体并转染miRNA模拟物和抑制物,将其和ADAR的表达载体共转染至人胚肾细胞293T(HEK293T细胞),用qRT-PCR检测miRNA的表达水平,并通过荧光素酶报告基因活性分析法对已测得异常表达的miRNA的靶基因ERBB2和HOXA1进行活性分析,检测ADAR与测得异常表达的miRNA的靶基因的关系.结果:与髓核组织相比,脊索瘤组织中miR-10a和miR-125a的相对表达程度明显下调(P＜0.05).脊索瘤组织中miR-10a和miR-125a的前体cDNA序列中出现了腺苷酸向鸟苷酸(A-G)突变,而在髓核组织中miR-10a和miR-125a前体的cDNA序列中无此改变,miR-10a和miR-125a在成熟过程中出现了A-IRNA编辑.4组脊索瘤组织中有3组存在ADAR1过度表达,2组存在ADAR2过度表达.转染了miRNA抑制物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现上调,而miR-10a和miR-125a的表达出现下调,miR-10a的靶基因ERBB2和miR-125a的靶基因HOXA1的荧光素酶活性显著增高;相反,转染了miRNA模拟物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现下调,而miR-10a和miR-125a的表达出现上调,ERBB2和HOXA1的荧光素酶活性显著降低.结论:ADAR1的过度表达可能通过介导A-I RNA编辑影响miR-10a和miR-125a的成熟和表达,参与脊索瘤发生中的细胞异常增殖调控.
目的:檢測脊索瘤組織中microRNA (miRNA)的差異性錶達情況,探討其RNA編輯.方法:使用RT-qPCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)技術檢測骶骨脊索瘤組織1 1種候選miRNA的錶達水平,將其與髓覈組織中的錶達水平進行比較,對錶達異常的miRNA前體(pri-miRNAs)的DNA和cDNA序列進行對比,檢測是否存在RNA編輯.使用蛋白印跡法(Western blot)檢測脊索瘤組織中RNA編輯的關鍵酶RNA腺苷脫氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADARs)的錶達.構建ADAR的錶達載體,同時構建ERBB2和HOXA1的3'-非翻譯區報告載體併轉染miRNA模擬物和抑製物,將其和ADAR的錶達載體共轉染至人胚腎細胞293T(HEK293T細胞),用qRT-PCR檢測miRNA的錶達水平,併通過熒光素酶報告基因活性分析法對已測得異常錶達的miRNA的靶基因ERBB2和HOXA1進行活性分析,檢測ADAR與測得異常錶達的miRNA的靶基因的關繫.結果:與髓覈組織相比,脊索瘤組織中miR-10a和miR-125a的相對錶達程度明顯下調(P＜0.05).脊索瘤組織中miR-10a和miR-125a的前體cDNA序列中齣現瞭腺苷痠嚮鳥苷痠(A-G)突變,而在髓覈組織中miR-10a和miR-125a前體的cDNA序列中無此改變,miR-10a和miR-125a在成熟過程中齣現瞭A-IRNA編輯.4組脊索瘤組織中有3組存在ADAR1過度錶達,2組存在ADAR2過度錶達.轉染瞭miRNA抑製物的HEK293T細胞中ADAR1錶達齣現上調,而miR-10a和miR-125a的錶達齣現下調,miR-10a的靶基因ERBB2和miR-125a的靶基因HOXA1的熒光素酶活性顯著增高;相反,轉染瞭miRNA模擬物的HEK293T細胞中ADAR1錶達齣現下調,而miR-10a和miR-125a的錶達齣現上調,ERBB2和HOXA1的熒光素酶活性顯著降低.結論:ADAR1的過度錶達可能通過介導A-I RNA編輯影響miR-10a和miR-125a的成熟和錶達,參與脊索瘤髮生中的細胞異常增殖調控.
목적:검측척색류조직중microRNA (miRNA)적차이성표체정황,탐토기RNA편집.방법:사용RT-qPCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)기술검측저골척색류조직1 1충후선miRNA적표체수평,장기여수핵조직중적표체수평진행비교,대표체이상적miRNA전체(pri-miRNAs)적DNA화cDNA서렬진행대비,검측시부존재RNA편집.사용단백인적법(Western blot)검측척색류조직중RNA편집적관건매RNA선감탈안매(adenosine deaminase acting on RNA,ADARs)적표체.구건ADAR적표체재체,동시구건ERBB2화HOXA1적3'-비번역구보고재체병전염miRNA모의물화억제물,장기화ADAR적표체재체공전염지인배신세포293T(HEK293T세포),용qRT-PCR검측miRNA적표체수평,병통과형광소매보고기인활성분석법대이측득이상표체적miRNA적파기인ERBB2화HOXA1진행활성분석,검측ADAR여측득이상표체적miRNA적파기인적관계.결과:여수핵조직상비,척색류조직중miR-10a화miR-125a적상대표체정도명현하조(P＜0.05).척색류조직중miR-10a화miR-125a적전체cDNA서렬중출현료선감산향조감산(A-G)돌변,이재수핵조직중miR-10a화miR-125a전체적cDNA서렬중무차개변,miR-10a화miR-125a재성숙과정중출현료A-IRNA편집.4조척색류조직중유3조존재ADAR1과도표체,2조존재ADAR2과도표체.전염료miRNA억제물적HEK293T세포중ADAR1표체출현상조,이miR-10a화miR-125a적표체출현하조,miR-10a적파기인ERBB2화miR-125a적파기인HOXA1적형광소매활성현저증고;상반,전염료miRNA모의물적HEK293T세포중ADAR1표체출현하조,이miR-10a화miR-125a적표체출현상조,ERBB2화HOXA1적형광소매활성현저강저.결론:ADAR1적과도표체가능통과개도A-I RNA편집영향miR-10a화miR-125a적성숙화표체,삼여척색류발생중적세포이상증식조공.
