中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2014年
11期
2015-2020
,共6页
房祥峰%钱江%孟锦绣%李东风%吴健
房祥峰%錢江%孟錦繡%李東風%吳健
방상봉%전강%맹금수%리동풍%오건
胸腺基质淋巴细胞生成素%胸腺基质淋巴细胞生成素受体%慢病毒载体%抗原85B%人支气管上皮细胞
胸腺基質淋巴細胞生成素%胸腺基質淋巴細胞生成素受體%慢病毒載體%抗原85B%人支氣管上皮細胞
흉선기질림파세포생성소%흉선기질림파세포생성소수체%만병독재체%항원85B%인지기관상피세포
Thymic stromal lymphopoietin%Thymic stromal lymphopoietin receptor%Lentiviral vector%Antigen 85B%Human bronchial epithelia cells
目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制.方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85B和EGFP报告基因的慢病毒载体pLVX-IRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒).用鉴定后的Ag85B慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率.利用Lipofectamine(R) 2000使Ag85B慢病毒感染体外培养NHBEC,设立空病毒感染和空白对照组.Real-time PCR和Western blotting检测Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平.结果:成功构建Ag85B慢病毒感染NHBEC体系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2×10H TU/L,感染效率达到90％以上.Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85B慢病毒成功感染NH-BEC,可见相应Ag85B mRNA和蛋白表达.与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85B慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05).结论:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85B可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症.
目的:研究結覈分枝桿菌抗原85B(Ag85B)慢病毒對正常人支氣管上皮細胞(NHBEC)錶達胸腺基質淋巴細胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受體TSLPR的影響,探究Ag85B抑製哮喘氣道炎癥的機製.方法:將Ag85B基因重組質粒轉入293T細胞,構建攜帶Ag85B和EGFP報告基因的慢病毒載體pLVX-IRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒).用鑒定後的Ag85B慢病毒感染HEK293細胞,計算滴度併觀察感染效率.利用Lipofectamine(R) 2000使Ag85B慢病毒感染體外培養NHBEC,設立空病毒感染和空白對照組.Real-time PCR和Western blotting檢測Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白錶達水平.結果:成功構建Ag85B慢病毒感染NHBEC體繫,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h後,熒光顯微鏡下可見彊綠色熒光蛋白錶達,細胞生長狀態良好,病毒滴度為2×10H TU/L,感染效率達到90％以上.Real-time PCR和Western blotting結果顯示Ag85B慢病毒成功感染NH-BEC,可見相應Ag85B mRNA和蛋白錶達.與空病毒感染和空白對照組比較,Ag85B慢病毒感染組TSLP mRNA錶達有下降趨勢,TSLPR mRNA與TSLP和TSLPR的蛋白錶達水平均顯著降低(P＜0.05).結論:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑製NHBEC的TSLP和TSLPR的錶達,提示Ag85B可能通過靶嚮阻滯TSLP-TSLPR途徑抑製哮喘氣道炎癥.
목적:연구결핵분지간균항원85B(Ag85B)만병독대정상인지기관상피세포(NHBEC)표체흉선기질림파세포생성소(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)화기수체TSLPR적영향,탐구Ag85B억제효천기도염증적궤제.방법:장Ag85B기인중조질립전입293T세포,구건휴대Ag85B화EGFP보고기인적만병독재체pLVX-IRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B만병독).용감정후적Ag85B만병독감염HEK293세포,계산적도병관찰감염효솔.이용Lipofectamine(R) 2000사Ag85B만병독감염체외배양NHBEC,설립공병독감염화공백대조조.Real-time PCR화Western blotting검측Ag85B、TSLP화TSLPR mRNA화단백표체수평.결과:성공구건Ag85B만병독감염NHBEC체계,Ag85B만병독감염NHBEC 48 h후,형광현미경하가견강록색형광단백표체,세포생장상태량호,병독적도위2×10H TU/L,감염효솔체도90％이상.Real-time PCR화Western blotting결과현시Ag85B만병독성공감염NH-BEC,가견상응Ag85B mRNA화단백표체.여공병독감염화공백대조조비교,Ag85B만병독감염조TSLP mRNA표체유하강추세,TSLPR mRNA여TSLP화TSLPR적단백표체수평균현저강저(P＜0.05).결론:Ag85B만병독감염NHBEC가이억제NHBEC적TSLP화TSLPR적표체,제시Ag85B가능통과파향조체TSLP-TSLPR도경억제효천기도염증.
