中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2014年
11期
1998-2003
,共6页
段玉洁%聂丽珠%田玲%李治%陈震%唐霓
段玉潔%聶麗珠%田玲%李治%陳震%唐霓
단옥길%섭려주%전령%리치%진진%당예
基因,Arid2%肝细胞癌%SMMC-7721细胞%细胞增殖%细胞周期
基因,Arid2%肝細胞癌%SMMC-7721細胞%細胞增殖%細胞週期
기인,Arid2%간세포암%SMMC-7721세포%세포증식%세포주기
Genes,Arid2%Hepatocellular carcinoma%SMMC-7721 cells%cell proliferation%Cell cycle
目的:通过RNA干扰技术沉默内源性抑癌基因Arid2(siArid2)的表达,观察其对肝癌细胞生长及细胞周期的影响.方法:设计3对特异性沉默Arid2基因的shRNA序列,分别克隆到腺病毒骨架载体上形成重组腺病毒质粒.将质粒转染到HEK293细胞中,包装和扩增形成完整高滴度的重组腺病毒AdsiArid2-1～3.用构建好的腺病毒感染人肝癌SMMC-7721细胞,Western blotting方法检测Arid2蛋白的表达,筛选干扰效果最佳的重组腺病毒.MTS技术和流式细胞术观察干扰Arid2基因后肝癌细胞增殖和细胞周期的变化.结果:成功构建了高滴度的重组腺病毒AdsiArid2-1～3.经Western blotting鉴定,AdsiArid2-3为抑制效果最佳的重组腺病毒.MTS结果显示,AdsiArid2组细胞在72 h、96 h的吸光度值与空细胞组和Adsicontrol组相比增高,细胞增殖速率明显加快.流式细胞术检测结果显示,AdsiArid2组处于G1期、S期的细胞百分比与空细胞组和Adsicontrol组相比,G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增多.结论:成功构建干扰Arid2的重组质粒及重组腺病毒.沉默Arid2可以促进肝癌细胞的增殖,促进其由G1期向S期的转换.
目的:通過RNA榦擾技術沉默內源性抑癌基因Arid2(siArid2)的錶達,觀察其對肝癌細胞生長及細胞週期的影響.方法:設計3對特異性沉默Arid2基因的shRNA序列,分彆剋隆到腺病毒骨架載體上形成重組腺病毒質粒.將質粒轉染到HEK293細胞中,包裝和擴增形成完整高滴度的重組腺病毒AdsiArid2-1～3.用構建好的腺病毒感染人肝癌SMMC-7721細胞,Western blotting方法檢測Arid2蛋白的錶達,篩選榦擾效果最佳的重組腺病毒.MTS技術和流式細胞術觀察榦擾Arid2基因後肝癌細胞增殖和細胞週期的變化.結果:成功構建瞭高滴度的重組腺病毒AdsiArid2-1～3.經Western blotting鑒定,AdsiArid2-3為抑製效果最佳的重組腺病毒.MTS結果顯示,AdsiArid2組細胞在72 h、96 h的吸光度值與空細胞組和Adsicontrol組相比增高,細胞增殖速率明顯加快.流式細胞術檢測結果顯示,AdsiArid2組處于G1期、S期的細胞百分比與空細胞組和Adsicontrol組相比,G1期細胞百分比明顯減少,S期細胞百分比明顯增多.結論:成功構建榦擾Arid2的重組質粒及重組腺病毒.沉默Arid2可以促進肝癌細胞的增殖,促進其由G1期嚮S期的轉換.
목적:통과RNA간우기술침묵내원성억암기인Arid2(siArid2)적표체,관찰기대간암세포생장급세포주기적영향.방법:설계3대특이성침묵Arid2기인적shRNA서렬,분별극륭도선병독골가재체상형성중조선병독질립.장질립전염도HEK293세포중,포장화확증형성완정고적도적중조선병독AdsiArid2-1～3.용구건호적선병독감염인간암SMMC-7721세포,Western blotting방법검측Arid2단백적표체,사선간우효과최가적중조선병독.MTS기술화류식세포술관찰간우Arid2기인후간암세포증식화세포주기적변화.결과:성공구건료고적도적중조선병독AdsiArid2-1～3.경Western blotting감정,AdsiArid2-3위억제효과최가적중조선병독.MTS결과현시,AdsiArid2조세포재72 h、96 h적흡광도치여공세포조화Adsicontrol조상비증고,세포증식속솔명현가쾌.류식세포술검측결과현시,AdsiArid2조처우G1기、S기적세포백분비여공세포조화Adsicontrol조상비,G1기세포백분비명현감소,S기세포백분비명현증다.결론:성공구건간우Arid2적중조질립급중조선병독.침묵Arid2가이촉진간암세포적증식,촉진기유G1기향S기적전환.
