中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2014年
11期
1946-1953
,共8页
赵富生%武庚%武杨%金秀东%张际绯%李月珍
趙富生%武庚%武楊%金秀東%張際緋%李月珍
조부생%무경%무양%금수동%장제비%리월진
瓦勒变性%坐骨神经%骨髓间充质干细胞%施万细胞%分化
瓦勒變性%坐骨神經%骨髓間充質榦細胞%施萬細胞%分化
와륵변성%좌골신경%골수간충질간세포%시만세포%분화
Waller degeneration%Sciatic nerve%Bone marrow mesenchymal stem cells%Schwann cells%Differentiation
目的:通过观察瓦勒变性坐骨神经段对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、分泌功能以及向施万细胞(Schwann cells,SCs)分化的影响,探讨其在BMSCs向SCs分化中的作用及可能的机制.方法:采用全骨髓贴壁法分离、培养SD大鼠BMSCs,并采用免疫荧光法鉴定.应用Transwell建立坐骨神经段与BMSCs双层培养体系,将实验分为瓦勒变性坐骨神经段与BMSCs联合培养组(A组)、正常坐骨神经段与BMSCs联合培养组(B组)和BMSCs单独培养组(C组).倒置相差显微镜观察联合培养过程中BMSCs形态变化;免疫荧光染色检测联合培养第7天各组BMSCs表达S-100情况;联合培养第0、l、4、7、11、14天,利用细胞计数法绘制各组BMSCs生长曲线,ELISA法检测各组培养液上清中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)含量,实时荧光定量PCR检测各组BMSCs中S-100 mRNA表达情况.结果:成功分离培养BMSCs,免疫荧光鉴定BMSCs呈CD29、CD44和CD90表达阳性.联合培养第7天倒置相差显微镜观察可见,A组BMSCs胞体回缩,呈梭形,并带有突起,形态类似SCs;B、C组大部分BMSCs形态无明显变化.联合培养第7天免疫荧光染色示,A、B、C组BMSCs S-100阳性表达率分别为31.1％±2.9％、16.2％±1.7％和0.42％±0.07％,A组阳性表达率明显增高(P＜0.05).各组BMSCs生长曲线均近似“S”形,从第4天开始,A组BMSCs增殖速度明显快于B、C组(P＜0.05);ELISA法检测示,A组NGF含量呈时间依赖性增加,于联合培养第7天达高峰,随后呈下降趋势.B、C组NGF含量随共培养时间延长有所增加,但显著低于A组(P＜0.05);实时荧光定量PCR检测示,联合培养第4、7、11、14天,A组S-100 mRNA表达明显高于B、C组(P＜0.05).结论:瓦勒变性坐骨神经段能有效促进大鼠BMSCs增殖并诱导BMSCs向SCs样细胞分化,联合培养过程中NGF可能参与BMSCs向SCs分化的调控.
目的:通過觀察瓦勒變性坐骨神經段對大鼠骨髓間充質榦細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、分泌功能以及嚮施萬細胞(Schwann cells,SCs)分化的影響,探討其在BMSCs嚮SCs分化中的作用及可能的機製.方法:採用全骨髓貼壁法分離、培養SD大鼠BMSCs,併採用免疫熒光法鑒定.應用Transwell建立坐骨神經段與BMSCs雙層培養體繫,將實驗分為瓦勒變性坐骨神經段與BMSCs聯閤培養組(A組)、正常坐骨神經段與BMSCs聯閤培養組(B組)和BMSCs單獨培養組(C組).倒置相差顯微鏡觀察聯閤培養過程中BMSCs形態變化;免疫熒光染色檢測聯閤培養第7天各組BMSCs錶達S-100情況;聯閤培養第0、l、4、7、11、14天,利用細胞計數法繪製各組BMSCs生長麯線,ELISA法檢測各組培養液上清中神經生長因子(nerve growth factor,NGF)含量,實時熒光定量PCR檢測各組BMSCs中S-100 mRNA錶達情況.結果:成功分離培養BMSCs,免疫熒光鑒定BMSCs呈CD29、CD44和CD90錶達暘性.聯閤培養第7天倒置相差顯微鏡觀察可見,A組BMSCs胞體迴縮,呈梭形,併帶有突起,形態類似SCs;B、C組大部分BMSCs形態無明顯變化.聯閤培養第7天免疫熒光染色示,A、B、C組BMSCs S-100暘性錶達率分彆為31.1％±2.9％、16.2％±1.7％和0.42％±0.07％,A組暘性錶達率明顯增高(P＜0.05).各組BMSCs生長麯線均近似“S”形,從第4天開始,A組BMSCs增殖速度明顯快于B、C組(P＜0.05);ELISA法檢測示,A組NGF含量呈時間依賴性增加,于聯閤培養第7天達高峰,隨後呈下降趨勢.B、C組NGF含量隨共培養時間延長有所增加,但顯著低于A組(P＜0.05);實時熒光定量PCR檢測示,聯閤培養第4、7、11、14天,A組S-100 mRNA錶達明顯高于B、C組(P＜0.05).結論:瓦勒變性坐骨神經段能有效促進大鼠BMSCs增殖併誘導BMSCs嚮SCs樣細胞分化,聯閤培養過程中NGF可能參與BMSCs嚮SCs分化的調控.
목적:통과관찰와륵변성좌골신경단대대서골수간충질간세포(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)증식、분비공능이급향시만세포(Schwann cells,SCs)분화적영향,탐토기재BMSCs향SCs분화중적작용급가능적궤제.방법:채용전골수첩벽법분리、배양SD대서BMSCs,병채용면역형광법감정.응용Transwell건립좌골신경단여BMSCs쌍층배양체계,장실험분위와륵변성좌골신경단여BMSCs연합배양조(A조)、정상좌골신경단여BMSCs연합배양조(B조)화BMSCs단독배양조(C조).도치상차현미경관찰연합배양과정중BMSCs형태변화;면역형광염색검측연합배양제7천각조BMSCs표체S-100정황;연합배양제0、l、4、7、11、14천,이용세포계수법회제각조BMSCs생장곡선,ELISA법검측각조배양액상청중신경생장인자(nerve growth factor,NGF)함량,실시형광정량PCR검측각조BMSCs중S-100 mRNA표체정황.결과:성공분리배양BMSCs,면역형광감정BMSCs정CD29、CD44화CD90표체양성.연합배양제7천도치상차현미경관찰가견,A조BMSCs포체회축,정사형,병대유돌기,형태유사SCs;B、C조대부분BMSCs형태무명현변화.연합배양제7천면역형광염색시,A、B、C조BMSCs S-100양성표체솔분별위31.1％±2.9％、16.2％±1.7％화0.42％±0.07％,A조양성표체솔명현증고(P＜0.05).각조BMSCs생장곡선균근사“S”형,종제4천개시,A조BMSCs증식속도명현쾌우B、C조(P＜0.05);ELISA법검측시,A조NGF함량정시간의뢰성증가,우연합배양제7천체고봉,수후정하강추세.B、C조NGF함량수공배양시간연장유소증가,단현저저우A조(P＜0.05);실시형광정량PCR검측시,연합배양제4、7、11、14천,A조S-100 mRNA표체명현고우B、C조(P＜0.05).결론:와륵변성좌골신경단능유효촉진대서BMSCs증식병유도BMSCs향SCs양세포분화,연합배양과정중NGF가능삼여BMSCs향SCs분화적조공.
