广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2014年
22期
3460-3463
,共4页
郑海燕%阮健%潘玲兰%刘见桥
鄭海燕%阮健%潘玲蘭%劉見橋
정해연%원건%반령란%류견교
Capthesin L%上皮-间充质转化%宫颈癌
Capthesin L%上皮-間充質轉化%宮頸癌
Capthesin L%상피-간충질전화%궁경암
Capthesin L%EMT%cervical cancer
目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响宫颈癌细胞的侵袭及迁移能力.方法 利用荧光定量PCR来检测人宫颈癌细胞HeLa、CaSki以及HeLa229中Cathepsin L的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的宫颈癌细胞HeLa以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,通过Western blot和定量PCR来验证shRNA的干扰效率,拟将Cathepsin L-shRNA和空白对照载体转染HeLa细胞,并将构建好的稳定细胞株命名为HeLa/shRNA,空白组和对照组分别为HeLa和HeLa/Con.通过Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、WNT-5a的变化.结果 Cathepsin L-shRNA转染后,能够有效抑制HeLa细胞中Cathepsin L的表达;Transwell法检测结果显示,Cathepsin L干扰组细胞侵袭及迁移能力显著低于阴性对照组(P ＜0.001).Western blot法检测结果发现,Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、WNT-5a表达较对照组显著下降.结论 运用RNA干扰技术能够有效沉默HeLa细胞的Cathepsin L基因,并诱导其迁移侵袭能力的下降,其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT,从而影响宫颈癌细胞的迁移及侵袭.提示Cathepsin L在宫颈癌的发生发展中起重要作用,抑制Cathepsin L的表达可能成为一种治疗宫颈癌的新方法.
目的 探討溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)是否通過上皮-間充質轉化(EMT)影響宮頸癌細胞的侵襲及遷移能力.方法 利用熒光定量PCR來檢測人宮頸癌細胞HeLa、CaSki以及HeLa229中Cathepsin L的錶達水平;設計併閤成靶嚮Cathepsin L的特異性shRNA,通過脂質體轉染法轉染Cathepsin L錶達最高的宮頸癌細胞HeLa以構建穩定低錶達Cathepsin L細胞株,通過Western blot和定量PCR來驗證shRNA的榦擾效率,擬將Cathepsin L-shRNA和空白對照載體轉染HeLa細胞,併將構建好的穩定細胞株命名為HeLa/shRNA,空白組和對照組分彆為HeLa和HeLa/Con.通過Transwell法檢測榦擾後細胞的遷移及侵襲能力,Western blot法檢測EMT相關指標E-cadherin和N-cadherin以及其上遊信號分子Snail、WNT-5a的變化.結果 Cathepsin L-shRNA轉染後,能夠有效抑製HeLa細胞中Cathepsin L的錶達;Transwell法檢測結果顯示,Cathepsin L榦擾組細胞侵襲及遷移能力顯著低于陰性對照組(P ＜0.001).Western blot法檢測結果髮現,Cathepsin L榦擾組細胞的E-cadherin錶達增加,N-cadherin的錶達降低;此外,Cathepsin L榦擾組細胞的Snail、WNT-5a錶達較對照組顯著下降.結論 運用RNA榦擾技術能夠有效沉默HeLa細胞的Cathepsin L基因,併誘導其遷移侵襲能力的下降,其可能的機製是通過調節EMT的上遊信號分子Snail、WNT-5a的錶達來調控EMT,從而影響宮頸癌細胞的遷移及侵襲.提示Cathepsin L在宮頸癌的髮生髮展中起重要作用,抑製Cathepsin L的錶達可能成為一種治療宮頸癌的新方法.
목적 탐토용매체조직단백매L(Cathepsin L)시부통과상피-간충질전화(EMT)영향궁경암세포적침습급천이능력.방법 이용형광정량PCR래검측인궁경암세포HeLa、CaSki이급HeLa229중Cathepsin L적표체수평;설계병합성파향Cathepsin L적특이성shRNA,통과지질체전염법전염Cathepsin L표체최고적궁경암세포HeLa이구건은정저표체Cathepsin L세포주,통과Western blot화정량PCR래험증shRNA적간우효솔,의장Cathepsin L-shRNA화공백대조재체전염HeLa세포,병장구건호적은정세포주명명위HeLa/shRNA,공백조화대조조분별위HeLa화HeLa/Con.통과Transwell법검측간우후세포적천이급침습능력,Western blot법검측EMT상관지표E-cadherin화N-cadherin이급기상유신호분자Snail、WNT-5a적변화.결과 Cathepsin L-shRNA전염후,능구유효억제HeLa세포중Cathepsin L적표체;Transwell법검측결과현시,Cathepsin L간우조세포침습급천이능력현저저우음성대조조(P ＜0.001).Western blot법검측결과발현,Cathepsin L간우조세포적E-cadherin표체증가,N-cadherin적표체강저;차외,Cathepsin L간우조세포적Snail、WNT-5a표체교대조조현저하강.결론 운용RNA간우기술능구유효침묵HeLa세포적Cathepsin L기인,병유도기천이침습능력적하강,기가능적궤제시통과조절EMT적상유신호분자Snail、WNT-5a적표체래조공EMT,종이영향궁경암세포적천이급침습.제시Cathepsin L재궁경암적발생발전중기중요작용,억제Cathepsin L적표체가능성위일충치료궁경암적신방법.
