健康之路
健康之路
건강지로
HEALTH
2015年
1期
1-1
,共1页
血管生成抑制因子%小鼠%色素上皮衍生因子%原核表达
血管生成抑製因子%小鼠%色素上皮衍生因子%原覈錶達
혈관생성억제인자%소서%색소상피연생인자%원핵표체
目的：：克隆小鼠PEDF基因,构建其原核表达载体并进行初步诱导表达.方法：根据 GenBank提供的 mRNA 序列设计引物,并分别加上 EcoR I/Hind III 酶切位点.提取小鼠肝脏总RNA,RT－PCR法扩增小鼠PEDF基因,然后连接到T载体并测序鉴定.将酶切得到的PEDF基因连接到原核表达载体 pET－28a,酶切验证.将构建好的重组载体转化到表达菌株 E．coli M15中,经过 IPTG诱导后对细胞破碎液进行 SDS－PAGE电泳检测.结果：测序表明成功克隆小鼠PEDF基因,酶切表明小鼠PEDF基因原核表达载体构建成功,SDS－PAGE电泳表明重组载体能够在 E．coli M15中进行诱导表达.结论：成功克隆小鼠PEDF基因,并构建其原核表达载体,重组载体能够在 E．coli M15中内进行诱导表达.
目的：：剋隆小鼠PEDF基因,構建其原覈錶達載體併進行初步誘導錶達.方法：根據 GenBank提供的 mRNA 序列設計引物,併分彆加上 EcoR I/Hind III 酶切位點.提取小鼠肝髒總RNA,RT－PCR法擴增小鼠PEDF基因,然後連接到T載體併測序鑒定.將酶切得到的PEDF基因連接到原覈錶達載體 pET－28a,酶切驗證.將構建好的重組載體轉化到錶達菌株 E．coli M15中,經過 IPTG誘導後對細胞破碎液進行 SDS－PAGE電泳檢測.結果：測序錶明成功剋隆小鼠PEDF基因,酶切錶明小鼠PEDF基因原覈錶達載體構建成功,SDS－PAGE電泳錶明重組載體能夠在 E．coli M15中進行誘導錶達.結論：成功剋隆小鼠PEDF基因,併構建其原覈錶達載體,重組載體能夠在 E．coli M15中內進行誘導錶達.
목적：：극륭소서PEDF기인,구건기원핵표체재체병진행초보유도표체.방법：근거 GenBank제공적 mRNA 서렬설계인물,병분별가상 EcoR I/Hind III 매절위점.제취소서간장총RNA,RT－PCR법확증소서PEDF기인,연후련접도T재체병측서감정.장매절득도적PEDF기인련접도원핵표체재체 pET－28a,매절험증.장구건호적중조재체전화도표체균주 E．coli M15중,경과 IPTG유도후대세포파쇄액진행 SDS－PAGE전영검측.결과：측서표명성공극륭소서PEDF기인,매절표명소서PEDF기인원핵표체재체구건성공,SDS－PAGE전영표명중조재체능구재 E．coli M15중진행유도표체.결론：성공극륭소서PEDF기인,병구건기원핵표체재체,중조재체능구재 E．coli M15중내진행유도표체.
