南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
10期
1739-1743
,共5页
陈小玲%张穗生%黄俊%雷富%陈东
陳小玲%張穗生%黃俊%雷富%陳東
진소령%장수생%황준%뢰부%진동
里氏木霉%纤维素酶%纤维二糖水解酶基因%分子改造%碱基突变
裏氏木黴%纖維素酶%纖維二糖水解酶基因%分子改造%堿基突變
리씨목매%섬유소매%섬유이당수해매기인%분자개조%감기돌변
T.reesei%cellulase%cbh1 gene%molecular modification%base mutation
[目的]用分子改造的方法改造里氏木霉(Trichoderma reesei的纤维二糖水解酶基因cbh1,提高其纤维素酶活力,为工业化生产纤维素酶提供参考.[方法]用DNaseI消化里氏木霉cbh1,回收100 bp左右的片段后用T4 DNA连接酶连接,以连接产物作为模板进行PCR扩增,将PCR改造的cbh1基因转化里氏木霉原生质体,使改造的cbh1基因与里氏木霉原有的cbh1基因发生同源重组.通过比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的突变菌株,在NCBI上比对分析突变菌株的cbh1序列.[结果]经克隆测序获得基因片段大小为637 bp,与里氏木霉同属菌株cbh1基因的相似性在88‰98％,确定为里氏木霉cbh1的基因片段.经DNaseI消化15 min、T4 DNA连接酶连接、经PCR扩增获得改造后的cbh1基因.将改造cbh1基因片段转化里氏木霉原生质体,得到cbh1基因突变体库.从cbh1基因突变体库中筛选获得1株纤维素酶滤纸酶活比出发菌株高1.7518倍的突变菌株E2-1.序列比对分析发现,与出发菌株相比,突变菌株E2-1的cbh1基因有14个碱基发生了突变,其中5个碱基为置换突变,8个碱基为缺失突变,1个碱基为插入突变,分布于cbh1基因的9个位置.[结论]改造后的cbhl因能与里氏木霉的染色体DNA发生同源重组,进而提高突变菌株的纤维素滤纸酶活力.
[目的]用分子改造的方法改造裏氏木黴(Trichoderma reesei的纖維二糖水解酶基因cbh1,提高其纖維素酶活力,為工業化生產纖維素酶提供參攷.[方法]用DNaseI消化裏氏木黴cbh1,迴收100 bp左右的片段後用T4 DNA連接酶連接,以連接產物作為模闆進行PCR擴增,將PCR改造的cbh1基因轉化裏氏木黴原生質體,使改造的cbh1基因與裏氏木黴原有的cbh1基因髮生同源重組.通過比較濾紙酶活力的方法篩選纖維素酶活力提高的突變菌株,在NCBI上比對分析突變菌株的cbh1序列.[結果]經剋隆測序穫得基因片段大小為637 bp,與裏氏木黴同屬菌株cbh1基因的相似性在88‰98％,確定為裏氏木黴cbh1的基因片段.經DNaseI消化15 min、T4 DNA連接酶連接、經PCR擴增穫得改造後的cbh1基因.將改造cbh1基因片段轉化裏氏木黴原生質體,得到cbh1基因突變體庫.從cbh1基因突變體庫中篩選穫得1株纖維素酶濾紙酶活比齣髮菌株高1.7518倍的突變菌株E2-1.序列比對分析髮現,與齣髮菌株相比,突變菌株E2-1的cbh1基因有14箇堿基髮生瞭突變,其中5箇堿基為置換突變,8箇堿基為缺失突變,1箇堿基為插入突變,分佈于cbh1基因的9箇位置.[結論]改造後的cbhl因能與裏氏木黴的染色體DNA髮生同源重組,進而提高突變菌株的纖維素濾紙酶活力.
[목적]용분자개조적방법개조리씨목매(Trichoderma reesei적섬유이당수해매기인cbh1,제고기섬유소매활력,위공업화생산섬유소매제공삼고.[방법]용DNaseI소화리씨목매cbh1,회수100 bp좌우적편단후용T4 DNA련접매련접,이련접산물작위모판진행PCR확증,장PCR개조적cbh1기인전화리씨목매원생질체,사개조적cbh1기인여리씨목매원유적cbh1기인발생동원중조.통과비교려지매활력적방법사선섬유소매활력제고적돌변균주,재NCBI상비대분석돌변균주적cbh1서렬.[결과]경극륭측서획득기인편단대소위637 bp,여리씨목매동속균주cbh1기인적상사성재88‰98％,학정위리씨목매cbh1적기인편단.경DNaseI소화15 min、T4 DNA련접매련접、경PCR확증획득개조후적cbh1기인.장개조cbh1기인편단전화리씨목매원생질체,득도cbh1기인돌변체고.종cbh1기인돌변체고중사선획득1주섬유소매려지매활비출발균주고1.7518배적돌변균주E2-1.서렬비대분석발현,여출발균주상비,돌변균주E2-1적cbh1기인유14개감기발생료돌변,기중5개감기위치환돌변,8개감기위결실돌변,1개감기위삽입돌변,분포우cbh1기인적9개위치.[결론]개조후적cbhl인능여리씨목매적염색체DNA발생동원중조,진이제고돌변균주적섬유소려지매활력.
