现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2015年
1期
4-7
,共4页
凋亡抑制蛋白%Livin%凋亡%原核表达%纯化
凋亡抑製蛋白%Livin%凋亡%原覈錶達%純化
조망억제단백%Livin%조망%원핵표체%순화
inhibitor of apoptosis protein%Livin%apoptosis%prokaryotic expression%purification
目的：对凋亡抑制蛋白Livin的两种异构体（ Livin-α和Livin-β）进行原核表达，对获得的Livin蛋白进行纯化。方法：以Hela细胞总RNA为模板，RT-PCR获得Livin-α和Livin-β基因全长cDNA序列，酶切后，插入原核表达载体pET32a（+）的多克隆位点，经酶切、PCR鉴定、测序后，构建Livin基因异构体表达载体pET32a（+）-Livin-α和pET32a（+）-Livin-β。将重组质粒转入表达菌株BL21，诱导表达，收集菌液，超声碎菌，取其上清和沉淀分别进行 SDS-PAGE电泳，并对获得的 Livin蛋白进行纯化。结果：成功获得Livin-α和Livin-β全长cDNA序列，克隆到原核表达载体pET32a（+）上后进行诱导表达，获得大小为55kD左右的可溶性融合蛋白，经纯化后，有效减少了杂蛋白的含量。结论：Livin基因异构体原核表达载体的构建及其融合蛋白的制备、纯化，为进一步将Livin基因的两种异构体蛋白应用于抗体制备以及各类肿瘤的临床辅助诊断研究奠定了基础。
目的：對凋亡抑製蛋白Livin的兩種異構體（ Livin-α和Livin-β）進行原覈錶達，對穫得的Livin蛋白進行純化。方法：以Hela細胞總RNA為模闆，RT-PCR穫得Livin-α和Livin-β基因全長cDNA序列，酶切後，插入原覈錶達載體pET32a（+）的多剋隆位點，經酶切、PCR鑒定、測序後，構建Livin基因異構體錶達載體pET32a（+）-Livin-α和pET32a（+）-Livin-β。將重組質粒轉入錶達菌株BL21，誘導錶達，收集菌液，超聲碎菌，取其上清和沉澱分彆進行 SDS-PAGE電泳，併對穫得的 Livin蛋白進行純化。結果：成功穫得Livin-α和Livin-β全長cDNA序列，剋隆到原覈錶達載體pET32a（+）上後進行誘導錶達，穫得大小為55kD左右的可溶性融閤蛋白，經純化後，有效減少瞭雜蛋白的含量。結論：Livin基因異構體原覈錶達載體的構建及其融閤蛋白的製備、純化，為進一步將Livin基因的兩種異構體蛋白應用于抗體製備以及各類腫瘤的臨床輔助診斷研究奠定瞭基礎。
목적：대조망억제단백Livin적량충이구체（ Livin-α화Livin-β）진행원핵표체，대획득적Livin단백진행순화。방법：이Hela세포총RNA위모판，RT-PCR획득Livin-α화Livin-β기인전장cDNA서렬，매절후，삽입원핵표체재체pET32a（+）적다극륭위점，경매절、PCR감정、측서후，구건Livin기인이구체표체재체pET32a（+）-Livin-α화pET32a（+）-Livin-β。장중조질립전입표체균주BL21，유도표체，수집균액，초성쇄균，취기상청화침정분별진행 SDS-PAGE전영，병대획득적 Livin단백진행순화。결과：성공획득Livin-α화Livin-β전장cDNA서렬，극륭도원핵표체재체pET32a（+）상후진행유도표체，획득대소위55kD좌우적가용성융합단백，경순화후，유효감소료잡단백적함량。결론：Livin기인이구체원핵표체재체적구건급기융합단백적제비、순화，위진일보장Livin기인적량충이구체단백응용우항체제비이급각류종류적림상보조진단연구전정료기출。
Objective:To use the prokaryotic expression system to express the protein of Livin-αand Livin-β, and purify the protein of Livin-αand Livin-βby Ni-NTA Superflow system. Methods:Firstly,total RNA of Hela cell was extracted and the cDNA of Livin isoforms were coloned by RT-PCR. Then,the cDNA of Livin isoforms were inserted into pET32a( +)vector and the recombinant plasmids pET32a( +)-Livin-αand pET32a( +)-Livin-β were constructed. Finally,the Bacterium coli pET32a( +)-Livin-α/BL21 and pET32a( +)-Livin-β/BL21 were induced by IPTG and the expression of Livin-αand Livin-βprotein were analysed by SDS-PAGE,the protein of Livin-αand Livin-βwere purified by Ni-NTA Superflow system. Results:Full length cDNA of Livin-α and Livin-βwere cloned respectively and the fragment of Livin-αand Livin-βgenes were inserted into pET32a ( +)vector successfully. Fusion protein of Livin-α and Livin-β were expressed by pET32a( +)prokaryotic ex-pression system,the protein of Livin-α and Livin-β were purified successfully. Conclusion:The expression and purification of Livin-α and Livin-βprotein is essential to study the application prospect of Livin-αand Livin-βprotein in cancer diagnosis.
