林业科学研究
林業科學研究
임업과학연구
FOREST RESEARCH
2014年
6期
786-793
,共8页
宋传生%胡佳续%林彩丽%任争光%耿显胜%田国忠
宋傳生%鬍佳續%林綵麗%任爭光%耿顯勝%田國忠
송전생%호가속%림채려%임쟁광%경현성%전국충
泡桐丛枝植原体%胸苷酸激酶%原核表达%酶活性
泡桐叢枝植原體%胸苷痠激酶%原覈錶達%酶活性
포동총지식원체%흉감산격매%원핵표체%매활성
Paulownia witches'-broom phytoplasma%thymidylate kinase%prokaryotic expression%enzyme activity
胸苷酸激酶是dTTP从头合成和补救途径的关键酶,催化dTMP形成dTDP,在DNA复制和生物的生存中发挥着必不可少的作用.本文在前期研究的基础上,对从泡桐丛枝(PaWB)植原体中获得的的3个同源蛋白TMK-a-1、TMK-a-2及TMK-b与已报道的小麦蓝矮(WBD)、洋葱黄化(OY-W)植原体的TMK-a、TMK-b的氨基酸序列进行了比对和相似性分析,结果显示PaWBPS TMK-b与WBD TMK-2和OY-W TMK-b之间的相似性分别为95.65％和99.03％;PaWBPS TMK-a-1与PaWBPS TMK-a-2的相似性为90.57％,且二者与WBD TMK-1和OY-W TMK-a之间的相似性为87.32％-94.26％;而PaWBPS、WBD、OY-W三种植原体的TMK-a与TMK-b之间的相似性仅为22.22％-25.95％.构建了PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2的pET28a原核表达载体,对PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2 3种蛋白进行了原核表达,经Ni-NTA柱纯化后,利用双酶法进行了胸苷酸激酶催化活性测定,结果表明,PaWBPS TMK-b具有较高的胸苷酸激酶活性,为85.96±0.74 U· mg-1,而PaWBPS TMK-a-1和TMK-a-2几乎没有胸苷酸激酶活性.本文为进一步研究胸苷酸激酶在植原体繁殖过程中的作用机理奠定了基础.
胸苷痠激酶是dTTP從頭閤成和補救途徑的關鍵酶,催化dTMP形成dTDP,在DNA複製和生物的生存中髮揮著必不可少的作用.本文在前期研究的基礎上,對從泡桐叢枝(PaWB)植原體中穫得的的3箇同源蛋白TMK-a-1、TMK-a-2及TMK-b與已報道的小麥藍矮(WBD)、洋蔥黃化(OY-W)植原體的TMK-a、TMK-b的氨基痠序列進行瞭比對和相似性分析,結果顯示PaWBPS TMK-b與WBD TMK-2和OY-W TMK-b之間的相似性分彆為95.65％和99.03％;PaWBPS TMK-a-1與PaWBPS TMK-a-2的相似性為90.57％,且二者與WBD TMK-1和OY-W TMK-a之間的相似性為87.32％-94.26％;而PaWBPS、WBD、OY-W三種植原體的TMK-a與TMK-b之間的相似性僅為22.22％-25.95％.構建瞭PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2的pET28a原覈錶達載體,對PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2 3種蛋白進行瞭原覈錶達,經Ni-NTA柱純化後,利用雙酶法進行瞭胸苷痠激酶催化活性測定,結果錶明,PaWBPS TMK-b具有較高的胸苷痠激酶活性,為85.96±0.74 U· mg-1,而PaWBPS TMK-a-1和TMK-a-2幾乎沒有胸苷痠激酶活性.本文為進一步研究胸苷痠激酶在植原體繁殖過程中的作用機理奠定瞭基礎.
흉감산격매시dTTP종두합성화보구도경적관건매,최화dTMP형성dTDP,재DNA복제화생물적생존중발휘착필불가소적작용.본문재전기연구적기출상,대종포동총지(PaWB)식원체중획득적적3개동원단백TMK-a-1、TMK-a-2급TMK-b여이보도적소맥람왜(WBD)、양총황화(OY-W)식원체적TMK-a、TMK-b적안기산서렬진행료비대화상사성분석,결과현시PaWBPS TMK-b여WBD TMK-2화OY-W TMK-b지간적상사성분별위95.65％화99.03％;PaWBPS TMK-a-1여PaWBPS TMK-a-2적상사성위90.57％,차이자여WBD TMK-1화OY-W TMK-a지간적상사성위87.32％-94.26％;이PaWBPS、WBD、OY-W삼충식원체적TMK-a여TMK-b지간적상사성부위22.22％-25.95％.구건료PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2적pET28a원핵표체재체,대PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2 3충단백진행료원핵표체,경Ni-NTA주순화후,이용쌍매법진행료흉감산격매최화활성측정,결과표명,PaWBPS TMK-b구유교고적흉감산격매활성,위85.96±0.74 U· mg-1,이PaWBPS TMK-a-1화TMK-a-2궤호몰유흉감산격매활성.본문위진일보연구흉감산격매재식원체번식과정중적작용궤리전정료기출.
