中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2014年
8期
77-80
,共4页
朱强%王丕琳%张铁%尹子毅%曲更宝%殷咏梅
硃彊%王丕琳%張鐵%尹子毅%麯更寶%慇詠梅
주강%왕비림%장철%윤자의%곡경보%은영매
泛素交联酶UBE2D3%放射敏感性%蛋白相互作用%乳腺癌
汎素交聯酶UBE2D3%放射敏感性%蛋白相互作用%乳腺癌
범소교련매UBE2D3%방사민감성%단백상호작용%유선암
UBE2D3%radiosensitivity%protein interaction%breast cancer
目的 研究泛素交联酶UBE2D3(ubiquitin-conjugating enzyme E2D3)在端粒酶介导的放射敏感性调节机制中的作用.方法 针对UBE2D3基因序列,设计3条干扰序列,通过筛选选取1条干扰效率最优的序列并合成pshRNA-UBE2D3;在MCF-7细胞中,转染过表达质粒pEGFP-UBE2D3以及干扰质粒pshRNA-UBE2D3,Western blot检测UBE2D3对hTERT蛋白表达的影响;通过转染pEGFP-hTERT,Western blot法检测hTERT蛋白表达对UBE2D3的影响;通过转染pshRNA-UBE2D3抑制UBE2D3的表达,PCR-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测MCF-7细胞周期的变化,CCK-8法检测MCF-7细胞增殖情况,克隆形成法检测MCF-7细胞放射敏感性的变化.结果 成功筛选出一条针对UBE2D3的最优干扰序列,干扰UBE2D3能显著降低MCF-7细胞的放射敏感性;UBE2D3能参与hTERT调控放射敏感性的调节,抑制UBE2D3的表达可能通过上调hTERT和Cyclin D1的表达、增加hTERT的活性、加速G1期向S期转变以及提高MCF-7细胞的增殖从而降低MCF-7细胞的放射敏感性.然而,过表达UBE2D3未能检测到hTERT的表达差异.结论 抑制UBE2D3可能通过上调hTERT以及Cyclin D1的表达参与hTERT调节的放射敏感性的过程.
目的 研究汎素交聯酶UBE2D3(ubiquitin-conjugating enzyme E2D3)在耑粒酶介導的放射敏感性調節機製中的作用.方法 針對UBE2D3基因序列,設計3條榦擾序列,通過篩選選取1條榦擾效率最優的序列併閤成pshRNA-UBE2D3;在MCF-7細胞中,轉染過錶達質粒pEGFP-UBE2D3以及榦擾質粒pshRNA-UBE2D3,Western blot檢測UBE2D3對hTERT蛋白錶達的影響;通過轉染pEGFP-hTERT,Western blot法檢測hTERT蛋白錶達對UBE2D3的影響;通過轉染pshRNA-UBE2D3抑製UBE2D3的錶達,PCR-ELISA法檢測耑粒酶活性,MTT法檢測MCF-7細胞週期的變化,CCK-8法檢測MCF-7細胞增殖情況,剋隆形成法檢測MCF-7細胞放射敏感性的變化.結果 成功篩選齣一條針對UBE2D3的最優榦擾序列,榦擾UBE2D3能顯著降低MCF-7細胞的放射敏感性;UBE2D3能參與hTERT調控放射敏感性的調節,抑製UBE2D3的錶達可能通過上調hTERT和Cyclin D1的錶達、增加hTERT的活性、加速G1期嚮S期轉變以及提高MCF-7細胞的增殖從而降低MCF-7細胞的放射敏感性.然而,過錶達UBE2D3未能檢測到hTERT的錶達差異.結論 抑製UBE2D3可能通過上調hTERT以及Cyclin D1的錶達參與hTERT調節的放射敏感性的過程.
목적 연구범소교련매UBE2D3(ubiquitin-conjugating enzyme E2D3)재단립매개도적방사민감성조절궤제중적작용.방법 침대UBE2D3기인서렬,설계3조간우서렬,통과사선선취1조간우효솔최우적서렬병합성pshRNA-UBE2D3;재MCF-7세포중,전염과표체질립pEGFP-UBE2D3이급간우질립pshRNA-UBE2D3,Western blot검측UBE2D3대hTERT단백표체적영향;통과전염pEGFP-hTERT,Western blot법검측hTERT단백표체대UBE2D3적영향;통과전염pshRNA-UBE2D3억제UBE2D3적표체,PCR-ELISA법검측단립매활성,MTT법검측MCF-7세포주기적변화,CCK-8법검측MCF-7세포증식정황,극륭형성법검측MCF-7세포방사민감성적변화.결과 성공사선출일조침대UBE2D3적최우간우서렬,간우UBE2D3능현저강저MCF-7세포적방사민감성;UBE2D3능삼여hTERT조공방사민감성적조절,억제UBE2D3적표체가능통과상조hTERT화Cyclin D1적표체、증가hTERT적활성、가속G1기향S기전변이급제고MCF-7세포적증식종이강저MCF-7세포적방사민감성.연이,과표체UBE2D3미능검측도hTERT적표체차이.결론 억제UBE2D3가능통과상조hTERT이급Cyclin D1적표체삼여hTERT조절적방사민감성적과정.
