中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2014年
8期
69-72
,共4页
STAT6-ORF%慢病毒颗粒%增强绿色荧光蛋白
STAT6-ORF%慢病毒顆粒%增彊綠色熒光蛋白
STAT6-ORF%만병독과립%증강록색형광단백
lateral ventricle injection%rat%gastric acid%pepsin
目的 本文旨在构建STAT6-ORF表达载体,包装成慢病毒颗粒.方法 应用嵌套PCR法从生长状态良好的293FT细胞的cDNA中扩增STAT6的完整读码框片段(2544 bp),根据需要在引物的5'端分别引入Cla Ⅰ和Mlu Ⅰ酶切位点,将PCR产物克隆到pMD20T载体上,得到pMD20T-STAT6-ORF克隆;测序验证后,用Cla Ⅰ和Mlu Ⅰ双酶切pMD20T-STAT6克隆,回收酶切产物得到的STAT6-ORF片段,通过T4 DNA连接酶连接到pLVTHm表达载体上,经双酶切和测序验证正确,获得pLVTHm-STAT6-ORF表达载体.结果 构建带有增强绿色荧光蛋白EGFP(enhanced green fluorescence protein)标记的STAT6-ORF表达载体,包装成慢病毒颗粒,结果表明成功构建及包装带STAT6-ORF目的片段的慢病毒表达载体.结论 pLVTHm-STAT6过表达载体构建成功,可以进行慢病毒包装与鉴定.
目的 本文旨在構建STAT6-ORF錶達載體,包裝成慢病毒顆粒.方法 應用嵌套PCR法從生長狀態良好的293FT細胞的cDNA中擴增STAT6的完整讀碼框片段(2544 bp),根據需要在引物的5'耑分彆引入Cla Ⅰ和Mlu Ⅰ酶切位點,將PCR產物剋隆到pMD20T載體上,得到pMD20T-STAT6-ORF剋隆;測序驗證後,用Cla Ⅰ和Mlu Ⅰ雙酶切pMD20T-STAT6剋隆,迴收酶切產物得到的STAT6-ORF片段,通過T4 DNA連接酶連接到pLVTHm錶達載體上,經雙酶切和測序驗證正確,穫得pLVTHm-STAT6-ORF錶達載體.結果 構建帶有增彊綠色熒光蛋白EGFP(enhanced green fluorescence protein)標記的STAT6-ORF錶達載體,包裝成慢病毒顆粒,結果錶明成功構建及包裝帶STAT6-ORF目的片段的慢病毒錶達載體.結論 pLVTHm-STAT6過錶達載體構建成功,可以進行慢病毒包裝與鑒定.
목적 본문지재구건STAT6-ORF표체재체,포장성만병독과립.방법 응용감투PCR법종생장상태량호적293FT세포적cDNA중확증STAT6적완정독마광편단(2544 bp),근거수요재인물적5'단분별인입Cla Ⅰ화Mlu Ⅰ매절위점,장PCR산물극륭도pMD20T재체상,득도pMD20T-STAT6-ORF극륭;측서험증후,용Cla Ⅰ화Mlu Ⅰ쌍매절pMD20T-STAT6극륭,회수매절산물득도적STAT6-ORF편단,통과T4 DNA련접매련접도pLVTHm표체재체상,경쌍매절화측서험증정학,획득pLVTHm-STAT6-ORF표체재체.결과 구건대유증강록색형광단백EGFP(enhanced green fluorescence protein)표기적STAT6-ORF표체재체,포장성만병독과립,결과표명성공구건급포장대STAT6-ORF목적편단적만병독표체재체.결론 pLVTHm-STAT6과표체재체구건성공,가이진행만병독포장여감정.
