中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2014年
8期
53-56
,共4页
王雪艳%蒋栋%费然%魏来%陈红松
王雪豔%蔣棟%費然%魏來%陳紅鬆
왕설염%장동%비연%위래%진홍송
乙型肝炎病毒%恩替卡韦%耐药%质粒
乙型肝炎病毒%恩替卡韋%耐藥%質粒
을형간염병독%은체잡위%내약%질립
hepatitis B virus%entecavir%drug-resistance%plasmid
目的 构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)恩替卡韦耐药突变株表达质粒并对其体外复制病毒学特征进行研究.方法 以含1.2倍HBV DNA全基因的质粒pUC-HBV1.2-WT为模板,应用PCR定点诱变技术构建恩替卡韦耐药突变株质粒,转染人肝癌细胞系HepG2细胞,建立HBV体外复制细胞模型,分析耐药突变株复制水平及表达活性.结果 成功构建恩替卡韦耐药突变株表达质粒pETv1(rtL180M+ M204V+ I169T+ M250V)和pETV2(rtL180M+ M204V+ T184G+ S202I).HBV体外复制细胞模型培养上清可检测到HBsAg和HBeAg及HBV DNA,细胞内可检测到HBV复制中间体;耐药突变株复制能力分别为野生株的47.4％和38.6％.结论 成功构建乙型肝炎病毒恩替卡韦耐药突变株表达质粒.不同突变形式的ETV耐药突变株体外复制能力较野生株下降.
目的 構建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)恩替卡韋耐藥突變株錶達質粒併對其體外複製病毒學特徵進行研究.方法 以含1.2倍HBV DNA全基因的質粒pUC-HBV1.2-WT為模闆,應用PCR定點誘變技術構建恩替卡韋耐藥突變株質粒,轉染人肝癌細胞繫HepG2細胞,建立HBV體外複製細胞模型,分析耐藥突變株複製水平及錶達活性.結果 成功構建恩替卡韋耐藥突變株錶達質粒pETv1(rtL180M+ M204V+ I169T+ M250V)和pETV2(rtL180M+ M204V+ T184G+ S202I).HBV體外複製細胞模型培養上清可檢測到HBsAg和HBeAg及HBV DNA,細胞內可檢測到HBV複製中間體;耐藥突變株複製能力分彆為野生株的47.4％和38.6％.結論 成功構建乙型肝炎病毒恩替卡韋耐藥突變株錶達質粒.不同突變形式的ETV耐藥突變株體外複製能力較野生株下降.
목적 구건을형간염병독(hepatitis B virus,HBV)은체잡위내약돌변주표체질립병대기체외복제병독학특정진행연구.방법 이함1.2배HBV DNA전기인적질립pUC-HBV1.2-WT위모판,응용PCR정점유변기술구건은체잡위내약돌변주질립,전염인간암세포계HepG2세포,건립HBV체외복제세포모형,분석내약돌변주복제수평급표체활성.결과 성공구건은체잡위내약돌변주표체질립pETv1(rtL180M+ M204V+ I169T+ M250V)화pETV2(rtL180M+ M204V+ T184G+ S202I).HBV체외복제세포모형배양상청가검측도HBsAg화HBeAg급HBV DNA,세포내가검측도HBV복제중간체;내약돌변주복제능력분별위야생주적47.4％화38.6％.결론 성공구건을형간염병독은체잡위내약돌변주표체질립.불동돌변형식적ETV내약돌변주체외복제능력교야생주하강.
