中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2014年
8期
1-4
,共4页
汪治宇%李幸%郭晓金%邢联萍%刘雅%单保恩
汪治宇%李倖%郭曉金%邢聯萍%劉雅%單保恩
왕치우%리행%곽효금%형련평%류아%단보은
前列腺癌%NEDD4-1%TrkA%泛素化
前列腺癌%NEDD4-1%TrkA%汎素化
전렬선암%NEDD4-1%TrkA%범소화
prostate cancer%NEDD4-1%TrkA%ubiquitination
目的 检测前列腺癌PC3细胞中泛素连接酶NEDD4-1 (neural precursor cell expressed developmentally downregulated 4-1,NEDD4-1)对酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)泛素化作用的研究,探讨NEDD4-1调节前列腺癌PC3细胞侵袭及迁移的机制.方法 采用脂质体瞬时转染法将NEDD4-1质粒转染入前列腺癌PC3细胞中,应用蛋白免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)结合免疫印迹(immunoblotting,IB)法,观察外源的NEDD4-1和TrkA的相互作用;共表达NEDD4-1和ubiquitin,用Co-IP结合IB法检测NEDD4-1对TrkA的泛素化作用;共表达NEDD4-1和ubiquitin的同时,用蛋白酶体抑制剂MG132处理,观察TrkA水平的改变.结果 转染NEDD4-1质粒后,外源性表达的NEDD4-1可与TrkA共沉淀;共表达NEDD4-1和ubiquitin后,NEDD4-1对内源的TrkA有泛素化作用,TrkA能与泛素共沉淀;共表达NEDD4-1和ubiquitin,用蛋白酶体抑制剂MGl32处理后,TrkA的泛素化降解被抑制.结论 在前列腺癌PC3细胞中,TrkA是NEDD4-1的底物之一;NEDD4-1可调节TrkA的泛素化作用,促进其在蛋白酶体降解.
目的 檢測前列腺癌PC3細胞中汎素連接酶NEDD4-1 (neural precursor cell expressed developmentally downregulated 4-1,NEDD4-1)對酪氨痠蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)汎素化作用的研究,探討NEDD4-1調節前列腺癌PC3細胞侵襲及遷移的機製.方法 採用脂質體瞬時轉染法將NEDD4-1質粒轉染入前列腺癌PC3細胞中,應用蛋白免疫共沉澱(co-immunoprecipitation,Co-IP)結閤免疫印跡(immunoblotting,IB)法,觀察外源的NEDD4-1和TrkA的相互作用;共錶達NEDD4-1和ubiquitin,用Co-IP結閤IB法檢測NEDD4-1對TrkA的汎素化作用;共錶達NEDD4-1和ubiquitin的同時,用蛋白酶體抑製劑MG132處理,觀察TrkA水平的改變.結果 轉染NEDD4-1質粒後,外源性錶達的NEDD4-1可與TrkA共沉澱;共錶達NEDD4-1和ubiquitin後,NEDD4-1對內源的TrkA有汎素化作用,TrkA能與汎素共沉澱;共錶達NEDD4-1和ubiquitin,用蛋白酶體抑製劑MGl32處理後,TrkA的汎素化降解被抑製.結論 在前列腺癌PC3細胞中,TrkA是NEDD4-1的底物之一;NEDD4-1可調節TrkA的汎素化作用,促進其在蛋白酶體降解.
목적 검측전렬선암PC3세포중범소련접매NEDD4-1 (neural precursor cell expressed developmentally downregulated 4-1,NEDD4-1)대락안산단백격매A(tyrosine kinase A,TrkA)범소화작용적연구,탐토NEDD4-1조절전렬선암PC3세포침습급천이적궤제.방법 채용지질체순시전염법장NEDD4-1질립전염입전렬선암PC3세포중,응용단백면역공침정(co-immunoprecipitation,Co-IP)결합면역인적(immunoblotting,IB)법,관찰외원적NEDD4-1화TrkA적상호작용;공표체NEDD4-1화ubiquitin,용Co-IP결합IB법검측NEDD4-1대TrkA적범소화작용;공표체NEDD4-1화ubiquitin적동시,용단백매체억제제MG132처리,관찰TrkA수평적개변.결과 전염NEDD4-1질립후,외원성표체적NEDD4-1가여TrkA공침정;공표체NEDD4-1화ubiquitin후,NEDD4-1대내원적TrkA유범소화작용,TrkA능여범소공침정;공표체NEDD4-1화ubiquitin,용단백매체억제제MGl32처리후,TrkA적범소화강해피억제.결론 재전렬선암PC3세포중,TrkA시NEDD4-1적저물지일;NEDD4-1가조절TrkA적범소화작용,촉진기재단백매체강해.
