中华实用儿科临床杂志
中華實用兒科臨床雜誌
중화실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2015年
2期
122-126
,共5页
杨海萍%姚丽%富建华%薛辛东
楊海萍%姚麗%富建華%薛辛東
양해평%요려%부건화%설신동
肺泡Ⅱ型上皮细胞%特异性标志物%上皮-间质转化%支气管肺发育不良%大鼠,新生
肺泡Ⅱ型上皮細胞%特異性標誌物%上皮-間質轉化%支氣管肺髮育不良%大鼠,新生
폐포Ⅱ형상피세포%특이성표지물%상피-간질전화%지기관폐발육불량%대서,신생
Alveolar epithelial type Ⅱ cell%Special marker%Epithelial-mesenchymal transition%Bronchopulmonary dysplasia%Rat,newborn
目的 研究在新生鼠支气管肺发育不良(BPD)发生、发展中肺泡Ⅱ型肺上皮细胞(AT2)标志物肺表面活性物质C(SPC)、E-钙黏白(E-cad)及间质细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA及蛋白动态表达变化,阐明肺上皮向间质转化(EMT)在BPD新生鼠肺发育障碍中的意义.方法 建立高体积分数氧暴露致新生鼠BPD模型(BPD组),以同样数量且暴露于空气中的新生鼠作为对照(对照组),2组于出生第3、7、14、21天采集肺组织标本,采用放射状肺泡计数(RAC值)、肺泡间隔厚度、肺泡面积/肺分隔面积(A/S)评价肺泡发育,分别应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)及Western-blot,检测AT2中上皮细胞标志物SPC、E-cad和间质细胞标志物N-cad、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平.结果 对照组和BPD组新生鼠RAC值、肺泡间隔厚度和A/S在第7、14、21天,对照组RAC值(7.38 ±0.92、9.25 ±0.70、9.88±0.99)和A/S(2.53 ±0.02、3.34 ±0.09、3.96 ±0.13)均高于BPD组RAC值(5.88 ±0.83、5.14±0.83、4.38±0.52)和A/S(1.88±0.03、1.95 ±0.03、1.89±0.02)(P均＜0.05),而BPD组肺泡间隔厚度(8.53 ±0.04、10.75±0.46、13.55 ±0.84)明显大于对照组(5.77 ±0.09、4.40 ±0.12、3.67 ±0.18)(P均＜0.01).第7、14、21天,对照组肺组织的E-cad的mRNA(2.43 ±0.60、2.59±0.48、3.37±0.53)及蛋白(18.39±1.77、18.29±1.52、11.48±1.72)的表达水平明显高于BPD组(mRNA:1.48±0.55、1.57 ±0.48、1.12 ±0.45;蛋白:9.50±1.38、8.57±1.06、8.22 ±1.31)(P均＜0.05),而SPC表达明显低于BPD组(P均＜0.05);第7、14、21天,BPD组间质细胞标记物N-cad、α-SMA明显高于对照组(P均＜0.05).结论 在BPD肺泡发育不良阶段,上皮细胞标志物水平下调(E-cad),间质细胞标志物水平上调,提示EMT可能参与了BPD发生过程.
目的 研究在新生鼠支氣管肺髮育不良(BPD)髮生、髮展中肺泡Ⅱ型肺上皮細胞(AT2)標誌物肺錶麵活性物質C(SPC)、E-鈣黏白(E-cad)及間質細胞標誌物N-鈣黏蛋白(N-cad)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA) mRNA及蛋白動態錶達變化,闡明肺上皮嚮間質轉化(EMT)在BPD新生鼠肺髮育障礙中的意義.方法 建立高體積分數氧暴露緻新生鼠BPD模型(BPD組),以同樣數量且暴露于空氣中的新生鼠作為對照(對照組),2組于齣生第3、7、14、21天採集肺組織標本,採用放射狀肺泡計數(RAC值)、肺泡間隔厚度、肺泡麵積/肺分隔麵積(A/S)評價肺泡髮育,分彆應用實時熒光定量PCR(real-time PCR)及Western-blot,檢測AT2中上皮細胞標誌物SPC、E-cad和間質細胞標誌物N-cad、α-SMA的mRNA及蛋白錶達水平.結果 對照組和BPD組新生鼠RAC值、肺泡間隔厚度和A/S在第7、14、21天,對照組RAC值(7.38 ±0.92、9.25 ±0.70、9.88±0.99)和A/S(2.53 ±0.02、3.34 ±0.09、3.96 ±0.13)均高于BPD組RAC值(5.88 ±0.83、5.14±0.83、4.38±0.52)和A/S(1.88±0.03、1.95 ±0.03、1.89±0.02)(P均＜0.05),而BPD組肺泡間隔厚度(8.53 ±0.04、10.75±0.46、13.55 ±0.84)明顯大于對照組(5.77 ±0.09、4.40 ±0.12、3.67 ±0.18)(P均＜0.01).第7、14、21天,對照組肺組織的E-cad的mRNA(2.43 ±0.60、2.59±0.48、3.37±0.53)及蛋白(18.39±1.77、18.29±1.52、11.48±1.72)的錶達水平明顯高于BPD組(mRNA:1.48±0.55、1.57 ±0.48、1.12 ±0.45;蛋白:9.50±1.38、8.57±1.06、8.22 ±1.31)(P均＜0.05),而SPC錶達明顯低于BPD組(P均＜0.05);第7、14、21天,BPD組間質細胞標記物N-cad、α-SMA明顯高于對照組(P均＜0.05).結論 在BPD肺泡髮育不良階段,上皮細胞標誌物水平下調(E-cad),間質細胞標誌物水平上調,提示EMT可能參與瞭BPD髮生過程.
목적 연구재신생서지기관폐발육불량(BPD)발생、발전중폐포Ⅱ형폐상피세포(AT2)표지물폐표면활성물질C(SPC)、E-개점백(E-cad)급간질세포표지물N-개점단백(N-cad)、α-평활기기동단백(α-SMA) mRNA급단백동태표체변화,천명폐상피향간질전화(EMT)재BPD신생서폐발육장애중적의의.방법 건립고체적분수양폭로치신생서BPD모형(BPD조),이동양수량차폭로우공기중적신생서작위대조(대조조),2조우출생제3、7、14、21천채집폐조직표본,채용방사상폐포계수(RAC치)、폐포간격후도、폐포면적/폐분격면적(A/S)평개폐포발육,분별응용실시형광정량PCR(real-time PCR)급Western-blot,검측AT2중상피세포표지물SPC、E-cad화간질세포표지물N-cad、α-SMA적mRNA급단백표체수평.결과 대조조화BPD조신생서RAC치、폐포간격후도화A/S재제7、14、21천,대조조RAC치(7.38 ±0.92、9.25 ±0.70、9.88±0.99)화A/S(2.53 ±0.02、3.34 ±0.09、3.96 ±0.13)균고우BPD조RAC치(5.88 ±0.83、5.14±0.83、4.38±0.52)화A/S(1.88±0.03、1.95 ±0.03、1.89±0.02)(P균＜0.05),이BPD조폐포간격후도(8.53 ±0.04、10.75±0.46、13.55 ±0.84)명현대우대조조(5.77 ±0.09、4.40 ±0.12、3.67 ±0.18)(P균＜0.01).제7、14、21천,대조조폐조직적E-cad적mRNA(2.43 ±0.60、2.59±0.48、3.37±0.53)급단백(18.39±1.77、18.29±1.52、11.48±1.72)적표체수평명현고우BPD조(mRNA:1.48±0.55、1.57 ±0.48、1.12 ±0.45;단백:9.50±1.38、8.57±1.06、8.22 ±1.31)(P균＜0.05),이SPC표체명현저우BPD조(P균＜0.05);제7、14、21천,BPD조간질세포표기물N-cad、α-SMA명현고우대조조(P균＜0.05).결론 재BPD폐포발육불량계단,상피세포표지물수평하조(E-cad),간질세포표지물수평상조,제시EMT가능삼여료BPD발생과정.
Objective To investigate the dynamic expression of mRNA and protein of surfactant protein C (SPC),E-cadherin (E-cad),N-cadherin (N-cad) and α-smooth muscle actin (α-SMA) and elucidate the significance of epithelial-mesenchymal transition (EMT) in a newborn rat model of Bronchopulmonary dysplasia (BPD).Methods A newborn rat model of BPD in hyperoxia was established,and a control group exposed to air was established.Lung tissue was collected on days 3,7,14,and 21,respectively.Alveolar development was evaluated by radical alveolar counts(RAC),including thickness of alveolar septum,ratio of alveolar and septa.Real-time PCR and Western-blot were used to detect levels of markers of epithelial cells (SPC,E-cad) and interstitial cells (N-cad,α-SMA) in AT2 and protein expression.Results On day 7,14,and 21,compared with the control group,RAC (7.38 ± 0.92,9.25 ± 0.70,9.88 ± 0.99) and alveolar area/pulmonary septal area ratios (A/S) (2.53 ± 0.02,3.34 ± 0.09,3.96 ± 0.13) were all higher in BPD group [RAC (5.88 ± 0.83,5.14 ± 0.83,4.38 ± 0.52) and A/S (1.88 ± 0.03,1.95 ± 0.03,1.89 ± 0.02)] (all P ＜ 0.05) ; the alveolar septum (8.53 ± 0.04,10.75 ± 0.46,13.55 ± 0.84) in BPD group were thicker than those (5.77 ± 0.09,4.40 ± 0.12,3.67 ± 0.18) in the control group (all P ＜ 0.01).The expressions of SPC and α-SMA in BPD group were significantly higher than those in the control group on day 14 and 21 (all P ＜ 0.05).The level of E-cad mRNA (2.43 ± 0.60,2.59 ± 0.48,3.37 ± 0.53) and protein (18.39 ± 1.77,18.29 ± 1.52,11.48 ± 1.72) for E-cad were higher in the control group than those (mRNA:1.48 ± 0.55,1.57 ± 0.48,1.12 ± 0.45 ;protein:9.50 ± 1.38,8.57 ± 1.06,8.22 ± 1.31) in BPD group was lower(P ＜ 0.05),while the level of N-cad was significantly higher(P ＜ 0.05) on day 7,14,and 21.Conclusions In the development of BPD,the markers of lung epithelial cells were down regulation,while the markers of interstitial cells were up-regulation,and these findings suggest that EMT from lung epithelial cells contributes to the occurrence of BPD.
