中华眼底病杂志
中華眼底病雜誌
중화안저병잡지
CHINESE JOURNAL OF OCULAR FUNDUS DISEASES
2015年
1期
67-71
,共5页
徐静%刘高勤%陈志刚%陆培荣
徐靜%劉高勤%陳誌剛%陸培榮
서정%류고근%진지강%륙배영
白细胞介素17%内皮细胞/病理生理学%细胞增殖%细胞运动%细胞凋亡
白細胞介素17%內皮細胞/病理生理學%細胞增殖%細胞運動%細胞凋亡
백세포개소17%내피세포/병리생이학%세포증식%세포운동%세포조망
Interleukin-17%Endothelial cells/pathophysiology%Cell proliferation%Cell movement%Apoptosis
目的 观察白细胞介素17(IL-17)在人视网膜血管内皮细胞(HREC)增生、迁移及凋亡中的作用.方法 体外培养HREC,并取对数生长期的细胞进行实验.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HREC中IL-17受体(IL-17R)基因和蛋白的表达.以不含IL-17的培养液培养细胞作为对照组.以浓度50、100、200、500 μg/L的1L-17培养液干预HREC,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)增生分析法检测不同浓度IL-17对HREC细胞增生的作用,细胞划痕法测定不同浓度IL-17对HREC细胞迁移的影响.以浓度200 μg/L的IL-17培养液干预HREC,采用流式细胞技术检测1L-17对HREC细胞凋亡的影响.以1、2 mg/L的IL-17培养液干预HREC,应用RT-PCR检测HREC中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase3)、凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)的mRNA表达,Western blot检测细胞中Caspase-3的蛋白表达.结果 HREC中存在IL-17R的基因和蛋白表达.CCK-8增生分析法结果显示,随着IL-17培养液的浓度不断增加,吸光度[A,旧称光密度(OD)]值也呈上升趋势.与对照组比较,200、500 μg/L干预组A值明显升高,差异均有统计学意义(t=-3.235、-6.276,P=0.032、0.000).细胞划痕法检测结果显示,干预12、24 h时,100 μg/L干预组(t=-3.551、-2.849,P=0.006、0.019)、200μg/L干预组(t=-10.347、-4.519,P=0.000、0.001)、500 μg/L干预组(t=-3.541、-2.607,P=0.008、0.036)HREC迁移距离均明显增加,差异有统计学意义.流式细胞技术检查结果显示,200 μg/L干预组细胞凋亡比例较对照组明显下调,差异有统计学意义(t=5.682,P=0.047).RT-PCR及琼脂糖电泳结果显示,经IL-17干预后HREC中bFGF的mRNA表达水平呈升高趋势,而Caspase-3和TSP-1的mRNA表达水平呈下调趋势.Western blot检测结果显示,经IL-17干预后HREC中Caspase-3蛋白表达呈下调趋势.结论 IL-17能促进HREC增生、迁移,并抑制HREC凋亡.其机制可能与促进bFGF表达、抑制Caspase-3表达有关.
目的 觀察白細胞介素17(IL-17)在人視網膜血管內皮細胞(HREC)增生、遷移及凋亡中的作用.方法 體外培養HREC,併取對數生長期的細胞進行實驗.採用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)、蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測HREC中IL-17受體(IL-17R)基因和蛋白的錶達.以不含IL-17的培養液培養細胞作為對照組.以濃度50、100、200、500 μg/L的1L-17培養液榦預HREC,採用細胞計數試劑盒-8(CCK-8)增生分析法檢測不同濃度IL-17對HREC細胞增生的作用,細胞劃痕法測定不同濃度IL-17對HREC細胞遷移的影響.以濃度200 μg/L的IL-17培養液榦預HREC,採用流式細胞技術檢測1L-17對HREC細胞凋亡的影響.以1、2 mg/L的IL-17培養液榦預HREC,應用RT-PCR檢測HREC中堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、含半胱氨痠的天鼕氨痠蛋白水解酶-3(Caspase3)、凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)的mRNA錶達,Western blot檢測細胞中Caspase-3的蛋白錶達.結果 HREC中存在IL-17R的基因和蛋白錶達.CCK-8增生分析法結果顯示,隨著IL-17培養液的濃度不斷增加,吸光度[A,舊稱光密度(OD)]值也呈上升趨勢.與對照組比較,200、500 μg/L榦預組A值明顯升高,差異均有統計學意義(t=-3.235、-6.276,P=0.032、0.000).細胞劃痕法檢測結果顯示,榦預12、24 h時,100 μg/L榦預組(t=-3.551、-2.849,P=0.006、0.019)、200μg/L榦預組(t=-10.347、-4.519,P=0.000、0.001)、500 μg/L榦預組(t=-3.541、-2.607,P=0.008、0.036)HREC遷移距離均明顯增加,差異有統計學意義.流式細胞技術檢查結果顯示,200 μg/L榦預組細胞凋亡比例較對照組明顯下調,差異有統計學意義(t=5.682,P=0.047).RT-PCR及瓊脂糖電泳結果顯示,經IL-17榦預後HREC中bFGF的mRNA錶達水平呈升高趨勢,而Caspase-3和TSP-1的mRNA錶達水平呈下調趨勢.Western blot檢測結果顯示,經IL-17榦預後HREC中Caspase-3蛋白錶達呈下調趨勢.結論 IL-17能促進HREC增生、遷移,併抑製HREC凋亡.其機製可能與促進bFGF錶達、抑製Caspase-3錶達有關.
목적 관찰백세포개소17(IL-17)재인시망막혈관내피세포(HREC)증생、천이급조망중적작용.방법 체외배양HREC,병취대수생장기적세포진행실험.채용역전록취합매련반응(RT-PCR)、단백면역인적법(Western blot)검측HREC중IL-17수체(IL-17R)기인화단백적표체.이불함IL-17적배양액배양세포작위대조조.이농도50、100、200、500 μg/L적1L-17배양액간예HREC,채용세포계수시제합-8(CCK-8)증생분석법검측불동농도IL-17대HREC세포증생적작용,세포화흔법측정불동농도IL-17대HREC세포천이적영향.이농도200 μg/L적IL-17배양액간예HREC,채용류식세포기술검측1L-17대HREC세포조망적영향.이1、2 mg/L적IL-17배양액간예HREC,응용RT-PCR검측HREC중감성성섬유세포생장인자(bFGF)、함반광안산적천동안산단백수해매-3(Caspase3)、응혈매민감단백-1(TSP-1)적mRNA표체,Western blot검측세포중Caspase-3적단백표체.결과 HREC중존재IL-17R적기인화단백표체.CCK-8증생분석법결과현시,수착IL-17배양액적농도불단증가,흡광도[A,구칭광밀도(OD)]치야정상승추세.여대조조비교,200、500 μg/L간예조A치명현승고,차이균유통계학의의(t=-3.235、-6.276,P=0.032、0.000).세포화흔법검측결과현시,간예12、24 h시,100 μg/L간예조(t=-3.551、-2.849,P=0.006、0.019)、200μg/L간예조(t=-10.347、-4.519,P=0.000、0.001)、500 μg/L간예조(t=-3.541、-2.607,P=0.008、0.036)HREC천이거리균명현증가,차이유통계학의의.류식세포기술검사결과현시,200 μg/L간예조세포조망비례교대조조명현하조,차이유통계학의의(t=5.682,P=0.047).RT-PCR급경지당전영결과현시,경IL-17간예후HREC중bFGF적mRNA표체수평정승고추세,이Caspase-3화TSP-1적mRNA표체수평정하조추세.Western blot검측결과현시,경IL-17간예후HREC중Caspase-3단백표체정하조추세.결론 IL-17능촉진HREC증생、천이,병억제HREC조망.기궤제가능여촉진bFGF표체、억제Caspase-3표체유관.
Objective To address the effect and mechanism of interleukin 17 (IL-17) on the proliferation,migration and apoptosis of human retinal vascular endothelial cells (HREC).Methods IL-17 receptor (IL-17R) mRNA and protein expression in human retinal vascular endothelial cells (HREC) were quantified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot.Cell proliferation of HREC was examined using CCK-8 assay in the presence of different concentrations of IL-17.Cell migration of HREC was detected using wound scratch assay.Flow cytometry was used to test the effect of IL-17 on the apoptosis of HREC.The effects of IL-17 on HREC expression of basic fibroblast growth factor (bFGF),Caspase-3 and thrombospondin-1 (TSP-1) were quantified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR).The effect of IL-17 on HREC expression of Caspase-3 was examined using Western blot.Results IL-17 receptor (IL-17R) expressed in HREC as quantified by RT-PCR and Western blot.The proliferation of HREC in the presence of IL-17 was promoted in a dosage-dependent manner (t=-3.235,-6.276 ;P=0.032,0.000).Wound scratch assay showed a significant increase in the migrated distance of HREC with IL-17 stimulation under the concentration of 100 μg/L(t=3.551,-2.849; P=0.006,0.019),200 μg/L(t=-10.347,-4.519; P=0.000,0.001) and 500 μg/L (t=-3.541,-2.607; P=0.008,0.036).The intervention of 200 μg/L IL-17 can effectively inhibit the apoptosis of HREC,compared with the control group using flow cytometry (t=5.682,P=0.047).RT-PCR results showed that IL-17 can promote the expression of bFGF and inhibit the expression of Caspase-3 and TSP-1.Western blot result also showed that IL-17 can suppress the protein expression of Caspase-3.Conclusion The mechanism of IL-17 promoting proliferation,migration but suppress apoptosis of HREC may via regulating the expression of bFGF and Caspase-3.
