医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2015年
2期
141-145
,共5页
陈艳%余年%解渊%张亢%狄晴
陳豔%餘年%解淵%張亢%狄晴
진염%여년%해연%장항%적청
高迁移率族蛋白1%脑微血管内皮细胞%多药耐药基因1a%P-糖蛋白%癫痫
高遷移率族蛋白1%腦微血管內皮細胞%多藥耐藥基因1a%P-糖蛋白%癲癇
고천이솔족단백1%뇌미혈관내피세포%다약내약기인1a%P-당단백%전간
High-mobility group box-1%Brain microvascular endothelial cell%Multidrug resistance gene 1a%P-glycoprotein%Epilepsy
目的：癫痫脑内可大量释放高迁移率族蛋白1（high mobility group box protein 1， HMGB1），但针对HMGB1与癫痫脑内血管内皮细胞过表达的耐药蛋白P-糖蛋白（P-glycoprotein， P-gp）关系的研究甚少。文中探讨HMGB1对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞P-gp表达的影响。方法体外培养永生化小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd．3，分为不同浓度HMGB1组（10、100、500、1000 ng／mL HMGB1处理bEnd．3细胞8 h）；不同时间HMGB1处理组（以100 ng／mL HMGB1处理bEnd．3细胞4、8、16、24、32 h）；对照组（给予等量正常培养基）。采用实时定量PCR检测bEnd．3细胞中P-gp编码基因多药耐药基因1a （mdr1a）mRNA表达水平，免疫印迹法、免疫细胞化学法检测P-gp蛋白表达水平。结果 qPCR结果显示：10、100、500、1000 ng／mL HMGB1组mdr1a mRNA表达量分别为1．646±0．176、1．777±0．135、1．617±0．043和1．398±0．182，较对照组（1．030±0．284）明显升高（P＜0．05）。 HMGB1处理4、8、16、24、32 h组mdr1a mRNA表达量分别为2．655±0．112、2．168± 0．212、1．823±0．232、1．418±0．376和1．445±0．123，较对照组（1．010±0．164）明显升高（P＜0．05）。免疫印迹法结果显示：与对照组比较，各浓度组P-gp蛋白表达水平均增高（P＜0．05），HMGB1处理8、16 h组P-gp蛋白表达增高（P＜0．05）。免疫细胞化学染色结果显示：100 ng／mL HMGB1处理16 h后P-gp蛋白表达灰度值（110．843±4．036）较对照组（160．303±2．193）明显减少（P＜0．01）。结论 HMGB1能够上调小鼠脑微血管内皮细胞耐药蛋白P-gp和其编码基因mdr1a表达，可能与中枢神经系统疾病尤其是癫痫的耐药相关。
目的：癲癇腦內可大量釋放高遷移率族蛋白1（high mobility group box protein 1， HMGB1），但針對HMGB1與癲癇腦內血管內皮細胞過錶達的耐藥蛋白P-糖蛋白（P-glycoprotein， P-gp）關繫的研究甚少。文中探討HMGB1對體外培養的小鼠腦微血管內皮細胞P-gp錶達的影響。方法體外培養永生化小鼠腦微血管內皮細胞株bEnd．3，分為不同濃度HMGB1組（10、100、500、1000 ng／mL HMGB1處理bEnd．3細胞8 h）；不同時間HMGB1處理組（以100 ng／mL HMGB1處理bEnd．3細胞4、8、16、24、32 h）；對照組（給予等量正常培養基）。採用實時定量PCR檢測bEnd．3細胞中P-gp編碼基因多藥耐藥基因1a （mdr1a）mRNA錶達水平，免疫印跡法、免疫細胞化學法檢測P-gp蛋白錶達水平。結果 qPCR結果顯示：10、100、500、1000 ng／mL HMGB1組mdr1a mRNA錶達量分彆為1．646±0．176、1．777±0．135、1．617±0．043和1．398±0．182，較對照組（1．030±0．284）明顯升高（P＜0．05）。 HMGB1處理4、8、16、24、32 h組mdr1a mRNA錶達量分彆為2．655±0．112、2．168± 0．212、1．823±0．232、1．418±0．376和1．445±0．123，較對照組（1．010±0．164）明顯升高（P＜0．05）。免疫印跡法結果顯示：與對照組比較，各濃度組P-gp蛋白錶達水平均增高（P＜0．05），HMGB1處理8、16 h組P-gp蛋白錶達增高（P＜0．05）。免疫細胞化學染色結果顯示：100 ng／mL HMGB1處理16 h後P-gp蛋白錶達灰度值（110．843±4．036）較對照組（160．303±2．193）明顯減少（P＜0．01）。結論 HMGB1能夠上調小鼠腦微血管內皮細胞耐藥蛋白P-gp和其編碼基因mdr1a錶達，可能與中樞神經繫統疾病尤其是癲癇的耐藥相關。
목적：전간뇌내가대량석방고천이솔족단백1（high mobility group box protein 1， HMGB1），단침대HMGB1여전간뇌내혈관내피세포과표체적내약단백P-당단백（P-glycoprotein， P-gp）관계적연구심소。문중탐토HMGB1대체외배양적소서뇌미혈관내피세포P-gp표체적영향。방법체외배양영생화소서뇌미혈관내피세포주bEnd．3，분위불동농도HMGB1조（10、100、500、1000 ng／mL HMGB1처리bEnd．3세포8 h）；불동시간HMGB1처리조（이100 ng／mL HMGB1처리bEnd．3세포4、8、16、24、32 h）；대조조（급여등량정상배양기）。채용실시정량PCR검측bEnd．3세포중P-gp편마기인다약내약기인1a （mdr1a）mRNA표체수평，면역인적법、면역세포화학법검측P-gp단백표체수평。결과 qPCR결과현시：10、100、500、1000 ng／mL HMGB1조mdr1a mRNA표체량분별위1．646±0．176、1．777±0．135、1．617±0．043화1．398±0．182，교대조조（1．030±0．284）명현승고（P＜0．05）。 HMGB1처리4、8、16、24、32 h조mdr1a mRNA표체량분별위2．655±0．112、2．168± 0．212、1．823±0．232、1．418±0．376화1．445±0．123，교대조조（1．010±0．164）명현승고（P＜0．05）。면역인적법결과현시：여대조조비교，각농도조P-gp단백표체수평균증고（P＜0．05），HMGB1처리8、16 h조P-gp단백표체증고（P＜0．05）。면역세포화학염색결과현시：100 ng／mL HMGB1처리16 h후P-gp단백표체회도치（110．843±4．036）교대조조（160．303±2．193）명현감소（P＜0．01）。결론 HMGB1능구상조소서뇌미혈관내피세포내약단백P-gp화기편마기인mdr1a표체，가능여중추신경계통질병우기시전간적내약상관。
[Abstract ] Objective High-mobility group box-1 (HMGB1) is abundantly released in the epileptogenic brain tissue , but few reports are seen about the effect of HMGB 1 on the expression of P-glycoprotein ( P-gp) in the vascular endothelial cells of the epi-leptogenic tissue .This study is to explore whether HMGB 1 can regulate P-gp expression in the brain microvascular endothelial cells of the mouse in vitro . Methods Immortalized brain microvascular endothelial bEnd .3 cells of the mouse were cultured in vitro and al-located to different concentration groups ( treated with culture medium containing 10 , 100 , 500 , and 1000 ng/mL HMGB1 for 8 hours), treatment duration groups (treated with culture medium containing 100 ng/mL HMGB1 for 4, 8, 16, 24, and 32 hours), and a control group ( treated with culture medium without HMGB 1 ) .The mRNA expression of P-gp-encoding gene-multidrug resistance gene 1a (mdr1a) was detected by real-time qPCR, and its protein expression determined by Western blot and immunocytochemistry . Results The results of qPCR manifested that the expressions of mdr 1a mRNA were 1.646 ±0.176, 1.777 ±0.135, 1.617 ±0.043, and 1.398 ±0.182 in the 10, 100, 500, and 1000 ng/mL HMGB1 groups, respectively, significantly higher than 1.030 ±0.284 in the control group (P<0.05), and so were those in the 4, 8, 16, 24 h, and 32 h groups (2.655 ±0.112, 2.168 ±0.212, 1.823 ± 0.232, 1.418 ±0.376, and 1.445 ±0.123) than in the control (1.010 ±0.164) (P <0.05).Western blot showed a significant increase in the P-gp protein expression in all the concentration groups (P<0.05) as well as in the 8 h and 16 h treatment duration groups as compared with the control group (P<0.05).Immunocytochemis-try also revealed a higher P-gp expression in the HMGB1-treated than in the control cells (P<0.01). Conclusion HMGB1 can upregu-late the expressions of mdr1a mRNA and P-gp protein in the brain microvascular endothelial cells of the mouse , which may associated with drug resistance of central nervous system diseases , especially that of epilepsy .
