畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2015年
2期
85-88
,共4页
朱鹏%张小飞%徐延伟%尹秀凤
硃鵬%張小飛%徐延偉%尹秀鳳
주붕%장소비%서연위%윤수봉
猪圆环病毒2型%重组Cap蛋白%免疫原性%中和活性
豬圓環病毒2型%重組Cap蛋白%免疫原性%中和活性
저원배병독2형%중조Cap단백%면역원성%중화활성
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利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳(Cap)蛋白.将优化合成的PCV2ORF2基因克隆到杆状病毒转移载体pFastHTA中,并将鉴定正确的重组质粒pFastHTA-Cap2转化至大肠杆菌感受态细胞,经蓝白斑筛选得到含有目的基因的重组杆状病毒质粒(rBac-Cap2),转染至Sf9细胞,获得重组杆状病毒,对感染重组杆状病毒的细胞培养物进行重组蛋白的表达,进行SDS-PAGE和Western blot分析,并对表达的重组蛋白进行小鼠免疫试验及其病毒血清中和试验.SDS-PAGE分析表明,优化合成的PCV2ORF2基因得到表达,蛋白分子质量大小为33 ku; Western blot证实重组蛋白能够识别抗PCV2阳性血清,表明重组蛋白具有反应原性;小鼠免疫试验结果显示,该蛋白能刺激机体产生特异性抗体,具有较好的免疫原性;病毒血清中和试验证实,抗PCV2 Cap血清抗体具有中和病毒的活性,中和效价为1:42.该蛋白在杆状病毒系统中的成功表达,为PCV2感染的诊断及亚单位疫苗的研制奠定基础.
利用Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統錶達豬圓環病毒2型(PCV2)覈衣殼(Cap)蛋白.將優化閤成的PCV2ORF2基因剋隆到桿狀病毒轉移載體pFastHTA中,併將鑒定正確的重組質粒pFastHTA-Cap2轉化至大腸桿菌感受態細胞,經藍白斑篩選得到含有目的基因的重組桿狀病毒質粒(rBac-Cap2),轉染至Sf9細胞,穫得重組桿狀病毒,對感染重組桿狀病毒的細胞培養物進行重組蛋白的錶達,進行SDS-PAGE和Western blot分析,併對錶達的重組蛋白進行小鼠免疫試驗及其病毒血清中和試驗.SDS-PAGE分析錶明,優化閤成的PCV2ORF2基因得到錶達,蛋白分子質量大小為33 ku; Western blot證實重組蛋白能夠識彆抗PCV2暘性血清,錶明重組蛋白具有反應原性;小鼠免疫試驗結果顯示,該蛋白能刺激機體產生特異性抗體,具有較好的免疫原性;病毒血清中和試驗證實,抗PCV2 Cap血清抗體具有中和病毒的活性,中和效價為1:42.該蛋白在桿狀病毒繫統中的成功錶達,為PCV2感染的診斷及亞單位疫苗的研製奠定基礎.
이용Bac-to-Bac간상병독표체계통표체저원배병독2형(PCV2)핵의각(Cap)단백.장우화합성적PCV2ORF2기인극륭도간상병독전이재체pFastHTA중,병장감정정학적중조질립pFastHTA-Cap2전화지대장간균감수태세포,경람백반사선득도함유목적기인적중조간상병독질립(rBac-Cap2),전염지Sf9세포,획득중조간상병독,대감염중조간상병독적세포배양물진행중조단백적표체,진행SDS-PAGE화Western blot분석,병대표체적중조단백진행소서면역시험급기병독혈청중화시험.SDS-PAGE분석표명,우화합성적PCV2ORF2기인득도표체,단백분자질량대소위33 ku; Western blot증실중조단백능구식별항PCV2양성혈청,표명중조단백구유반응원성;소서면역시험결과현시,해단백능자격궤체산생특이성항체,구유교호적면역원성;병독혈청중화시험증실,항PCV2 Cap혈청항체구유중화병독적활성,중화효개위1:42.해단백재간상병독계통중적성공표체,위PCV2감염적진단급아단위역묘적연제전정기출.
