浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2015年
2期
220-228
,共9页
应晨%阮川芬%汤逸飞%章华伟
應晨%阮川芬%湯逸飛%章華偉
응신%원천분%탕일비%장화위
内生细菌%产酶溶杆菌%发酵条件%正交实验%响应面分析法
內生細菌%產酶溶桿菌%髮酵條件%正交實驗%響應麵分析法
내생세균%산매용간균%발효조건%정교실험%향응면분석법
endophytic bacterium%Lysobacter enzymogenes%fermentation condition%orthogonal experiment%re-sponse surface analysis
以一株具有广谱抗菌活性的黄花蒿内生产酶溶杆菌（ Lysobacter enzymogenes） R-2-1为研究对象，在LB液态培养基基础上，通过正交试验确定了其最佳发酵培养基组成为：玉米粉20 g· L－1，花生粕20 g· L－1，豆粕20 g· L－1，酵母提取物2 g· L－1，胰蛋白胨4 g· L－1，（NH4）2SO46 g· L－1，K2HPO46 g· L－1，MgSO4·7H2O 4.8 g· L－1，MnSO4· H2 O 0.02 g· L－1，FeSO4·7H2 O 0.01 g· L－1，CaCl2·2H2 O 0.12 g· L－1，NaCl 2.4 g· L－1，核黄素3.0 g ·L－1，硫胺素1.2g·L－1，维生素B60.01g·L－1，生物素0.1g·L－1，优化后培养活菌数24h达到6.94×108cfu · mL－1。以菌株R-2-1总发酵代谢物产量为指标，在单因素实验的基础上，采用响应面法优化其发酵工艺条件，确定最佳发酵条件为：发酵时间87.2 h，初始pH 7.55，装液量204 mL，接种量7.90 mL，发酵物产量达（0.518±0.050） g·200 mL－1；通过摇床转速和发酵温度因素考查，确定在摇床转速210 r· min－1、发酵温度30℃条件下，该菌代谢物产量可进一步提高到（0.523±0.023） g·200 mL－1。本试验结果可为该菌杀菌剂扩大生产提供参考。
以一株具有廣譜抗菌活性的黃花蒿內生產酶溶桿菌（ Lysobacter enzymogenes） R-2-1為研究對象，在LB液態培養基基礎上，通過正交試驗確定瞭其最佳髮酵培養基組成為：玉米粉20 g· L－1，花生粕20 g· L－1，豆粕20 g· L－1，酵母提取物2 g· L－1，胰蛋白胨4 g· L－1，（NH4）2SO46 g· L－1，K2HPO46 g· L－1，MgSO4·7H2O 4.8 g· L－1，MnSO4· H2 O 0.02 g· L－1，FeSO4·7H2 O 0.01 g· L－1，CaCl2·2H2 O 0.12 g· L－1，NaCl 2.4 g· L－1，覈黃素3.0 g ·L－1，硫胺素1.2g·L－1，維生素B60.01g·L－1，生物素0.1g·L－1，優化後培養活菌數24h達到6.94×108cfu · mL－1。以菌株R-2-1總髮酵代謝物產量為指標，在單因素實驗的基礎上，採用響應麵法優化其髮酵工藝條件，確定最佳髮酵條件為：髮酵時間87.2 h，初始pH 7.55，裝液量204 mL，接種量7.90 mL，髮酵物產量達（0.518±0.050） g·200 mL－1；通過搖床轉速和髮酵溫度因素攷查，確定在搖床轉速210 r· min－1、髮酵溫度30℃條件下，該菌代謝物產量可進一步提高到（0.523±0.023） g·200 mL－1。本試驗結果可為該菌殺菌劑擴大生產提供參攷。
이일주구유엄보항균활성적황화호내생산매용간균（ Lysobacter enzymogenes） R-2-1위연구대상，재LB액태배양기기출상，통과정교시험학정료기최가발효배양기조성위：옥미분20 g· L－1，화생박20 g· L－1，두박20 g· L－1，효모제취물2 g· L－1，이단백동4 g· L－1，（NH4）2SO46 g· L－1，K2HPO46 g· L－1，MgSO4·7H2O 4.8 g· L－1，MnSO4· H2 O 0.02 g· L－1，FeSO4·7H2 O 0.01 g· L－1，CaCl2·2H2 O 0.12 g· L－1，NaCl 2.4 g· L－1，핵황소3.0 g ·L－1，류알소1.2g·L－1，유생소B60.01g·L－1，생물소0.1g·L－1，우화후배양활균수24h체도6.94×108cfu · mL－1。이균주R-2-1총발효대사물산량위지표，재단인소실험적기출상，채용향응면법우화기발효공예조건，학정최가발효조건위：발효시간87.2 h，초시pH 7.55，장액량204 mL，접충량7.90 mL，발효물산량체（0.518±0.050） g·200 mL－1；통과요상전속화발효온도인소고사，학정재요상전속210 r· min－1、발효온도30℃조건하，해균대사물산량가진일보제고도（0.523±0.023） g·200 mL－1。본시험결과가위해균살균제확대생산제공삼고。
An endophytic strain R-2-1, Lysobacter enzymogenes, was firstly isolated from traditional Chinese medicine Artemisia annua Linn.Bioassay indicated that the ethyl acetate extract of fermentation broth of this strain had a broad spectrum of antimicrobial activities.The present work focused on optimization of its fermentation conditions using or-thogonal experiment and response surface analysis ( RSA) .The former was used to optimize the LB liquid medium. The best medium included the following components:corn flour 20 g· L-1 , peanut meal 20 g· L-1 , bean pulp 20 g· L-1 , yeast extract 2 g· L-1 , tryptone 4 g· L-1 , ( NH4 ) 2 SO4 6 g· L-1 ,K2 HPO4 6 g· L-1 , MgSO4· 7H2 O 4.8 g· L-1 , MnSO4· H2 O 0.02 g· L-1 , FeSO4· 7H2 O 0.01 g· L-1 , CaCl2· 2H2 O 0.12 g· L-1 , NaCl 2.4 g· L-1 , riboflavin 3.0 g · L-1 , thiamine 1.2 g· L-1 , vitamin B6 0.01 g· L-1 , biotin 0.1 g· L-1 , and the number of living microbe of strain R-2-1 reached 6.94 ×108 cfu· mL-1 under the optimal condition after 24 h.The fermentation condition of L.enzymo-genes was optimized by RSA with statistical software Design Expert 7.00.Under the optimum conditions ( fermenta-tion time 87.2 h, initial pH 7.55, fermentation volume 204 mL, inoculation volume 7.90 mL), the yield reached (0.518 ±0.050) g· 200 mL-1 .The yield could be raised to (0.523 ±0.023) g· 200 mL-1 at 210 r· min-1 and 30℃conditions.These results could provide references to scale up production of biobactericide of L.enzymogenes R-2-1.
