实用肿瘤学杂志
實用腫瘤學雜誌
실용종류학잡지
JOURNAL OF PRACTICAL ONCOLOGY
2015年
1期
17-21
,共5页
靳红%谢凯%张美丽%孙晶%董猷元
靳紅%謝凱%張美麗%孫晶%董猷元
근홍%사개%장미려%손정%동유원
卵巢癌%cIAP1基因%RNA干扰
卵巢癌%cIAP1基因%RNA榦擾
란소암%cIAP1기인%RNA간우
Cellular inhibitor of apoptosis protein 1 ( cIAP1 )%Ovarian cancer%RNA interference (RNAi)
目的：构建针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体并稳定转染人卵巢癌Skov3细胞，观察该基因对卵巢癌细胞的影响。方法设计合成针对cIAP1的shRNA重组质粒表达载体，并筛选出最有效的干扰序列，获取pGPU6－cIAP1－shRNA稳定表达细胞株。 RT－PCR及Western blot检测转染组Sk-ov3细胞cIAP1基因mRNA及蛋白表达的水平，MTT法检测细胞生长，绘制生长曲线。结果测序验证针对cIAP1的shRNA重组质粒构建成功，并筛选cIAP1－2534为最佳干扰序列；流式细胞术分析cIAP1 shR-NA载体的转染效率可达74．7％，RT－PCR及Western blot检测干扰组Skov3细胞的cIAP1基因mRNA及蛋白表达水平明显降低（P＜0．05）。 MTT实验结果显示干扰组细胞的OD值显著低于正常组细胞（P＜0．05），干扰组细胞的生长速度明显慢于正常组（P＜0．05）。结论针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体可以有效抑制Skov3细胞中该基因的表达，cIAP1基因表达下调能在一定程度上抑制卵巢癌Skov3细胞的体外增殖能力及细胞侵袭能力。
目的：構建針對cIAP1基因的慢病毒shRNA錶達載體併穩定轉染人卵巢癌Skov3細胞，觀察該基因對卵巢癌細胞的影響。方法設計閤成針對cIAP1的shRNA重組質粒錶達載體，併篩選齣最有效的榦擾序列，穫取pGPU6－cIAP1－shRNA穩定錶達細胞株。 RT－PCR及Western blot檢測轉染組Sk-ov3細胞cIAP1基因mRNA及蛋白錶達的水平，MTT法檢測細胞生長，繪製生長麯線。結果測序驗證針對cIAP1的shRNA重組質粒構建成功，併篩選cIAP1－2534為最佳榦擾序列；流式細胞術分析cIAP1 shR-NA載體的轉染效率可達74．7％，RT－PCR及Western blot檢測榦擾組Skov3細胞的cIAP1基因mRNA及蛋白錶達水平明顯降低（P＜0．05）。 MTT實驗結果顯示榦擾組細胞的OD值顯著低于正常組細胞（P＜0．05），榦擾組細胞的生長速度明顯慢于正常組（P＜0．05）。結論針對cIAP1基因的慢病毒shRNA錶達載體可以有效抑製Skov3細胞中該基因的錶達，cIAP1基因錶達下調能在一定程度上抑製卵巢癌Skov3細胞的體外增殖能力及細胞侵襲能力。
목적：구건침대cIAP1기인적만병독shRNA표체재체병은정전염인란소암Skov3세포，관찰해기인대란소암세포적영향。방법설계합성침대cIAP1적shRNA중조질립표체재체，병사선출최유효적간우서렬，획취pGPU6－cIAP1－shRNA은정표체세포주。 RT－PCR급Western blot검측전염조Sk-ov3세포cIAP1기인mRNA급단백표체적수평，MTT법검측세포생장，회제생장곡선。결과측서험증침대cIAP1적shRNA중조질립구건성공，병사선cIAP1－2534위최가간우서렬；류식세포술분석cIAP1 shR-NA재체적전염효솔가체74．7％，RT－PCR급Western blot검측간우조Skov3세포적cIAP1기인mRNA급단백표체수평명현강저（P＜0．05）。 MTT실험결과현시간우조세포적OD치현저저우정상조세포（P＜0．05），간우조세포적생장속도명현만우정상조（P＜0．05）。결론침대cIAP1기인적만병독shRNA표체재체가이유효억제Skov3세포중해기인적표체，cIAP1기인표체하조능재일정정도상억제란소암Skov3세포적체외증식능력급세포침습능력。
[Abstratc] Objective The function of cIAP1 in the progression of ovarian cancer has not been clarified . This study is to explore the involvement of cIAP 1 in regulating biological behaviors of ovarian cancer cells by u-sing RNA interference(RNAi)technology.Mte hods The short hairpin RNA plasmid targeting cIAP1 was con-structed and transfected into Skov 3 cells.The levels of cIAP1 mRNA and protein were investigated by RT -PCR and Western Blot respectively .MTT assay and flow cytometry were used to evaluate cell proliferation and apopto-sis.R esults The rate of cIAP1 transfection was 74.7%performed by flow cytometric analysis .cIAP1 expression was significantly down -regulated at both mRNA and protein levels ,which resulted in a decrease of cell prolifera-tion and invasion capability in vitro .Conclusion This study implies that cIAP 1 might play an important role in the progression of ovarian cancer ,and it could be a potential target for therapeutic anti -cancer drugs .
