山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2015年
2期
24-26
,共3页
孔维信%邓振兴%张林%孙怀鑫%丁露露
孔維信%鄧振興%張林%孫懷鑫%丁露露
공유신%산진흥%장림%손부흠%정로로
足细胞%血栓素A2受体基因%小分子RNA干扰技术%基因敲低
足細胞%血栓素A2受體基因%小分子RNA榦擾技術%基因敲低
족세포%혈전소A2수체기인%소분자RNA간우기술%기인고저
目的：设计并筛选对足细胞血栓素A2受体（ Tbxa2r）基因表达敲低效果最佳的siRNA序列。方法培养永生性小鼠足细胞（MPC5），取生长占培养板70％细胞用于实验。设计4条 siRNA 序列（Tbxa2r-mus-1150、Tbxa2r-mus-1309、Tbxa2r-mus-1677、Tbxa2r-mus-1884），经转染效率验证后转染足细胞。将细胞分为四组：干扰组（以筛选出的干扰序列转染细胞）、空白组（正常细胞样品）、模拟组（只加转染试剂的细胞样品）、阴性对照组（转染无序干扰系列的细胞样品）。 Real-time PCR检测各组细胞Tbxa2r基因，Western blot法检测Tbxa2r蛋白。结果筛选出干扰效果最强的siRNA序列Tbxa2r-mus-1677，其转染24 h后对Tbxa2r基因表达干扰效果较小，而在转染48 h后足细胞Tbxa2r基因相对表达量最低。转染72 h后，细胞Tbxa2r蛋白相对表达量明显降低。结论采用Tbxa2r特异性siRNA技术成功敲低足细胞Tbxa2r基因表达，并筛选出敲低效果最佳的siRNA序列。
目的：設計併篩選對足細胞血栓素A2受體（ Tbxa2r）基因錶達敲低效果最佳的siRNA序列。方法培養永生性小鼠足細胞（MPC5），取生長佔培養闆70％細胞用于實驗。設計4條 siRNA 序列（Tbxa2r-mus-1150、Tbxa2r-mus-1309、Tbxa2r-mus-1677、Tbxa2r-mus-1884），經轉染效率驗證後轉染足細胞。將細胞分為四組：榦擾組（以篩選齣的榦擾序列轉染細胞）、空白組（正常細胞樣品）、模擬組（隻加轉染試劑的細胞樣品）、陰性對照組（轉染無序榦擾繫列的細胞樣品）。 Real-time PCR檢測各組細胞Tbxa2r基因，Western blot法檢測Tbxa2r蛋白。結果篩選齣榦擾效果最彊的siRNA序列Tbxa2r-mus-1677，其轉染24 h後對Tbxa2r基因錶達榦擾效果較小，而在轉染48 h後足細胞Tbxa2r基因相對錶達量最低。轉染72 h後，細胞Tbxa2r蛋白相對錶達量明顯降低。結論採用Tbxa2r特異性siRNA技術成功敲低足細胞Tbxa2r基因錶達，併篩選齣敲低效果最佳的siRNA序列。
목적：설계병사선대족세포혈전소A2수체（ Tbxa2r）기인표체고저효과최가적siRNA서렬。방법배양영생성소서족세포（MPC5），취생장점배양판70％세포용우실험。설계4조 siRNA 서렬（Tbxa2r-mus-1150、Tbxa2r-mus-1309、Tbxa2r-mus-1677、Tbxa2r-mus-1884），경전염효솔험증후전염족세포。장세포분위사조：간우조（이사선출적간우서렬전염세포）、공백조（정상세포양품）、모의조（지가전염시제적세포양품）、음성대조조（전염무서간우계렬적세포양품）。 Real-time PCR검측각조세포Tbxa2r기인，Western blot법검측Tbxa2r단백。결과사선출간우효과최강적siRNA서렬Tbxa2r-mus-1677，기전염24 h후대Tbxa2r기인표체간우효과교소，이재전염48 h후족세포Tbxa2r기인상대표체량최저。전염72 h후，세포Tbxa2r단백상대표체량명현강저。결론채용Tbxa2r특이성siRNA기술성공고저족세포Tbxa2r기인표체，병사선출고저효과최가적siRNA서렬。
