世界中医药
世界中醫藥
세계중의약
WORLD CHINESE MEDICINE
2015年
2期
162-168,173
,共8页
曹红燕%边艳琴%武超%李建缘%刘平%孙明瑜
曹紅燕%邊豔琴%武超%李建緣%劉平%孫明瑜
조홍연%변염금%무초%리건연%류평%손명유
中医方证相关%茵陈蒿汤%肝纤维化%无差错修复原则%基因分析
中醫方證相關%茵陳蒿湯%肝纖維化%無差錯脩複原則%基因分析
중의방증상관%인진호탕%간섬유화%무차착수복원칙%기인분석
Corresponding on Traditional Chinese medicine formula-syndrome%Hepatic fibrosis%Yin-Chen-hao Decoction%‘Er-ror free repair’principle%Gene analysis
目的：基于前期茵陈蒿汤类方抗肝硬化的方证病理基础结果，围绕“方-证相关”的学术内涵，提出了“方证相关时，方剂对机体基因的调控遵循‘无差错修复’原则”的假说；并探讨茵陈蒿汤对DMN诱导大鼠肝纤维化形成阶段肝组织库普弗细胞（Kupffer Cells，KCs）相关基因表达及对丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的影响。方法：采用wistar大鼠，于每周前3天连续腹腔注射0.5％二甲基亚硝胺（Dimethylnitrosamine，DMN）制备大鼠肝纤维化模型，2周末取模型组6只做动态观察。第3周初开始，在持续造模的同时给予茵陈蒿汤干预治疗到4周末，正常组与模型对照组给予等量生理盐水。4周末在3％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉情况下，杀鼠取材，检测肝功能、肝组织病理、肝组织羟脯氨酸含量、胶原半定量，并采用基因芯片检测分析茵陈蒿汤对模型大鼠肝组织基因表达谱的影响。结果：与正常组比较，造模4周大鼠血清肝功能水平明显升高（P＜0.01）；病理观察肝组织炎细胞显著浸润，胶原显著沉积（P＜0.01），肝组织白介素1（IL-1 b）、Cd68、肿瘤坏死因子受体超家族成员14（Tnfrsf14）、肿瘤坏死因子受体超家族成员9（Tnfrsf9）、TNF受体超家族成员6（Fas）、Cd14、结缔组织生长因子（Ctgf）、Ⅰ型胶原α2（Col1 a2）、胰岛素样生长因子结合蛋白（Igfals）、胰岛素样生长因子1（Igf1）、胰岛素样生长因子结合蛋白1（Igfbp1）、基质金属蛋白酶12（Mmp12）、基质金属蛋白酶2（Mmp2）、基质金属蛋白酶23（Mmp23）、趋化因子配体21（Ccl21）、蛋白激酶Cβ（Prkcb）基因表达明显上调，MAPK通路被激活。经2周治疗后茵陈蒿汤能显著降低DMN诱导的大鼠血清肝功能水平，抑制组织炎细胞的浸润与坏死，胶原沉积，并下调了肝组织IL-1 b、Cd68、Tnfrsf14、Tn-frsf9、Fas、Cd14、Ctgf、Col1 a2、Igfals、Igf1、Igfbp1、Mmp12、Mmp2、Mmp23、Ccl21、Prkcb 基因的表达，抑制了MAPK通路的活化。通过全基因芯片的分析，在茵陈蒿汤干预治疗后基因表达得到了不同程度的修复。结论：验证了“方证相关时，方剂对机体基因的调控遵循‘无差错修复’原则”的假说；茵陈蒿汤显著抑制DMN 诱导肝纤维化形成，其机制可能是调控了KCs，抑制相关炎症因子的释放，同时可能参与调控MAPK通路，从而达到抗肝纤维化的作用。
目的：基于前期茵陳蒿湯類方抗肝硬化的方證病理基礎結果，圍繞“方-證相關”的學術內涵，提齣瞭“方證相關時，方劑對機體基因的調控遵循‘無差錯脩複’原則”的假說；併探討茵陳蒿湯對DMN誘導大鼠肝纖維化形成階段肝組織庫普弗細胞（Kupffer Cells，KCs）相關基因錶達及對絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的影響。方法：採用wistar大鼠，于每週前3天連續腹腔註射0.5％二甲基亞硝胺（Dimethylnitrosamine，DMN）製備大鼠肝纖維化模型，2週末取模型組6隻做動態觀察。第3週初開始，在持續造模的同時給予茵陳蒿湯榦預治療到4週末，正常組與模型對照組給予等量生理鹽水。4週末在3％戊巴比妥鈉腹腔註射痳醉情況下，殺鼠取材，檢測肝功能、肝組織病理、肝組織羥脯氨痠含量、膠原半定量，併採用基因芯片檢測分析茵陳蒿湯對模型大鼠肝組織基因錶達譜的影響。結果：與正常組比較，造模4週大鼠血清肝功能水平明顯升高（P＜0.01）；病理觀察肝組織炎細胞顯著浸潤，膠原顯著沉積（P＜0.01），肝組織白介素1（IL-1 b）、Cd68、腫瘤壞死因子受體超傢族成員14（Tnfrsf14）、腫瘤壞死因子受體超傢族成員9（Tnfrsf9）、TNF受體超傢族成員6（Fas）、Cd14、結締組織生長因子（Ctgf）、Ⅰ型膠原α2（Col1 a2）、胰島素樣生長因子結閤蛋白（Igfals）、胰島素樣生長因子1（Igf1）、胰島素樣生長因子結閤蛋白1（Igfbp1）、基質金屬蛋白酶12（Mmp12）、基質金屬蛋白酶2（Mmp2）、基質金屬蛋白酶23（Mmp23）、趨化因子配體21（Ccl21）、蛋白激酶Cβ（Prkcb）基因錶達明顯上調，MAPK通路被激活。經2週治療後茵陳蒿湯能顯著降低DMN誘導的大鼠血清肝功能水平，抑製組織炎細胞的浸潤與壞死，膠原沉積，併下調瞭肝組織IL-1 b、Cd68、Tnfrsf14、Tn-frsf9、Fas、Cd14、Ctgf、Col1 a2、Igfals、Igf1、Igfbp1、Mmp12、Mmp2、Mmp23、Ccl21、Prkcb 基因的錶達，抑製瞭MAPK通路的活化。通過全基因芯片的分析，在茵陳蒿湯榦預治療後基因錶達得到瞭不同程度的脩複。結論：驗證瞭“方證相關時，方劑對機體基因的調控遵循‘無差錯脩複’原則”的假說；茵陳蒿湯顯著抑製DMN 誘導肝纖維化形成，其機製可能是調控瞭KCs，抑製相關炎癥因子的釋放，同時可能參與調控MAPK通路，從而達到抗肝纖維化的作用。
목적：기우전기인진호탕류방항간경화적방증병리기출결과，위요“방-증상관”적학술내함，제출료“방증상관시，방제대궤체기인적조공준순‘무차착수복’원칙”적가설；병탐토인진호탕대DMN유도대서간섬유화형성계단간조직고보불세포（Kupffer Cells，KCs）상관기인표체급대사렬원활화단백격매（MAPK）통로적영향。방법：채용wistar대서，우매주전3천련속복강주사0.5％이갑기아초알（Dimethylnitrosamine，DMN）제비대서간섬유화모형，2주말취모형조6지주동태관찰。제3주초개시，재지속조모적동시급여인진호탕간예치료도4주말，정상조여모형대조조급여등량생리염수。4주말재3％무파비타납복강주사마취정황하，살서취재，검측간공능、간조직병리、간조직간포안산함량、효원반정량，병채용기인심편검측분석인진호탕대모형대서간조직기인표체보적영향。결과：여정상조비교，조모4주대서혈청간공능수평명현승고（P＜0.01）；병리관찰간조직염세포현저침윤，효원현저침적（P＜0.01），간조직백개소1（IL-1 b）、Cd68、종류배사인자수체초가족성원14（Tnfrsf14）、종류배사인자수체초가족성원9（Tnfrsf9）、TNF수체초가족성원6（Fas）、Cd14、결체조직생장인자（Ctgf）、Ⅰ형효원α2（Col1 a2）、이도소양생장인자결합단백（Igfals）、이도소양생장인자1（Igf1）、이도소양생장인자결합단백1（Igfbp1）、기질금속단백매12（Mmp12）、기질금속단백매2（Mmp2）、기질금속단백매23（Mmp23）、추화인자배체21（Ccl21）、단백격매Cβ（Prkcb）기인표체명현상조，MAPK통로피격활。경2주치료후인진호탕능현저강저DMN유도적대서혈청간공능수평，억제조직염세포적침윤여배사，효원침적，병하조료간조직IL-1 b、Cd68、Tnfrsf14、Tn-frsf9、Fas、Cd14、Ctgf、Col1 a2、Igfals、Igf1、Igfbp1、Mmp12、Mmp2、Mmp23、Ccl21、Prkcb 기인적표체，억제료MAPK통로적활화。통과전기인심편적분석，재인진호탕간예치료후기인표체득도료불동정도적수복。결론：험증료“방증상관시，방제대궤체기인적조공준순‘무차착수복’원칙”적가설；인진호탕현저억제DMN 유도간섬유화형성，기궤제가능시조공료KCs，억제상관염증인자적석방，동시가능삼여조공MAPK통로，종이체도항간섬유화적작용。
Objective:Our previous study showed significantly efficacy of series formula of Yin-chen-hao Decoction (YCHD)on fibrosis models in rats induced dimethynitrosamine (DMN).From the perspective of formula-efficacy-syndrome,we proposed a hy-pothesis ‘corresponding permit on formula-syndrome,gene regulation of formula on suffering body follow‘error free repair’princi-ple’and explore the mechanism of action of YCHD.Methods:Liver fibrosis was induced in rats with DMN.YCHD was adminis-trated intragastrically for 2 weeks for rats.At the end of the fourth week,all of the animals were sacrificed and their liver samples were collected for histology and gene chip analyses.Results:Compared with the normal group,the blood serum ALT level of the rats was remarkably increased (P<0.01 )four weeks after modeling;the inflammatory cells of hepatic tissue was remarkably infil-trated according to pathological observance,the deposition of collagen was remarkable (P<0.01 ).There were remarkable up-reg-ulation of the expression of the genes including Interleukin 1 beta (IL-1 b),Cd68,Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 1 4 (Tnfrsf1 4),Tumor necrosis factor receptor superfamily,member 9 (Tnfrsf9),Fas,Cd1 4,Connective tissue growth factor (Ctgf),Collagen,type I,alpha 2(Col1 a2),Insulin-like growth factor binding protein,acid labile subunit(Igfals),Insu-lin-like growth factor 1 (Igf1 ),Insulin-like growth factor binding protein 1 (Igfbp1 ),Matrix metallopeptidase 1 2(Mmp1 2),Matrix metallopeptidase 2(Mmp2),Matrix metallopeptidase 23(Mmp23),Chemokine ligand 21 (Ccl21 )and Protein kinase C,beta (Prkcb)in hepatic tissue,and mitogen-activated protein kinase (MAPK)pathway was activated.Yin-Chen-Hao Decoction signif-icantly reduced the level of blood serum ALT inducted by DMN,restrained the infiltration and necrosis of the inflammatory cells of hepatic tissue,inhibited collagen deposit,decreased the expression of the genes including IL-1 b,Cd68,Tnfrsf1 4,Tnfrsf9,Fas, Cd1 4,Ctgf,Col1 a2,Igfals,Igf1 ,Igfbp1 ,Mmp1 2,Mmp2,Mmp23,Ccl21 and Prkcb,and restrained the activation of MAPK pathway.Conclusion:The hypothesis ‘corresponding permit on formula-syndrome,gene regulation of formula on suffering body follow‘error free repair’principle’was verified.The MOA of anti-fibrotic of Yin-Chen-Hao Decoction was regulation of the KCs action and MAPK pathway.
