动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2015年
3期
5-8
,共4页
屈素洁%莫胜兰%邹联斌%胡杰%张步娴%梁媛%粟艳琼%施开创%李军
屈素潔%莫勝蘭%鄒聯斌%鬍傑%張步嫻%樑媛%粟豔瓊%施開創%李軍
굴소길%막성란%추련빈%호걸%장보한%량원%속염경%시개창%리군
禽流感病毒%H 5 亚型%H 7 亚型%H 9 亚型%一步法多重RT-PCR
禽流感病毒%H 5 亞型%H 7 亞型%H 9 亞型%一步法多重RT-PCR
금류감병독%H 5 아형%H 7 아형%H 9 아형%일보법다중RT-PCR
Avian influenza virus%H5 subtype%H7 subtype%H9 subtype%one step-multiplex RT-PCR
为了建立能同时检测 H5、H7和 H9亚型禽流感病毒（AIV）的方法，参考 GenBank中 H5、H7和 H9亚型AIV的 HA基因序列的保守区域，利用Primer 5．0软件设计3对分别针对 AIV H5、H7和 H9亚型的特异性引物，预期特异扩增 H5 AIV片段大小为380 bp、H7 AIV为501 bp、H9 AIV为732 bp。经过反应条件的优化，建立了同时检测 H 5、H 7和 H 9亚型AIV的一步法多重 RT-PCR方法。该方法特异性强，对其他亚型AIV和禽呼吸道病原体检测结果为阴性；敏感性高，H5、H7和 H9亚型 AIV RNA的最低检出量分别为10－4、10－4、10－2拷贝／μL。初步建立了快速、敏感、特异地鉴别检测 H5、H7和 H9亚型禽流感病毒的分子生物学诊断方法。
為瞭建立能同時檢測 H5、H7和 H9亞型禽流感病毒（AIV）的方法，參攷 GenBank中 H5、H7和 H9亞型AIV的 HA基因序列的保守區域，利用Primer 5．0軟件設計3對分彆針對 AIV H5、H7和 H9亞型的特異性引物，預期特異擴增 H5 AIV片段大小為380 bp、H7 AIV為501 bp、H9 AIV為732 bp。經過反應條件的優化，建立瞭同時檢測 H 5、H 7和 H 9亞型AIV的一步法多重 RT-PCR方法。該方法特異性彊，對其他亞型AIV和禽呼吸道病原體檢測結果為陰性；敏感性高，H5、H7和 H9亞型 AIV RNA的最低檢齣量分彆為10－4、10－4、10－2拷貝／μL。初步建立瞭快速、敏感、特異地鑒彆檢測 H5、H7和 H9亞型禽流感病毒的分子生物學診斷方法。
위료건립능동시검측 H5、H7화 H9아형금류감병독（AIV）적방법，삼고 GenBank중 H5、H7화 H9아형AIV적 HA기인서렬적보수구역，이용Primer 5．0연건설계3대분별침대 AIV H5、H7화 H9아형적특이성인물，예기특이확증 H5 AIV편단대소위380 bp、H7 AIV위501 bp、H9 AIV위732 bp。경과반응조건적우화，건립료동시검측 H 5、H 7화 H 9아형AIV적일보법다중 RT-PCR방법。해방법특이성강，대기타아형AIV화금호흡도병원체검측결과위음성；민감성고，H5、H7화 H9아형 AIV RNA적최저검출량분별위10－4、10－4、10－2고패／μL。초보건립료쾌속、민감、특이지감별검측 H5、H7화 H9아형금류감병독적분자생물학진단방법。
To develop a rapid multiplex RT-PCR assay for detection of H5,H7,H9 subtype AIV,specific primers were designed with Primer 5.0 software according to the conserved region of the H5,H7,H9 sub-type AIV hemagglutinin gene.The results of this one step-multiplex RT-PCR demonstrated that the specif-ic bands of 380 bp,501 bp and 732 bp were observed simultaneously for RNA isolated from H5,H7 and H9 subtype AIV.And the reaction conditions were optimized to develop one step-multiplex RT-PCR assay for detection of H5,H7,H9 subtype AIV.The method has high specificity and sensitivity.The minimal amount of detection was 10-4 copies/μL RNA of H5,10-4 copies/μL RNA of H7 and 10-2 copies/μL RNA of H9 subtype AIV,respectively.There was no cross-reaction with other avian pathogens after amplifica-tion.The molecular diagnose method was preliminarily established to detect H5,H7 and H9 subtypes of a-vian influenza viruses rapidly,sensitively and specifically.
