CAJ | 학술논문

目的：探讨六味地黄丸对兔退变椎间盘髓核及纤维环细胞的保护作用。方法选择8月龄成年新西兰兔6只利用异常应力负荷及椎间失稳法建立新西兰兔腰椎椎间盘退变模型，病理切片确认模型成功后，取椎间盘分离软骨终板，将髓核及纤维环组织进行细胞培养，将生长良好的细胞随机分为对照组、损伤组与含药组。对照组细胞培养用胎牛血清体积分数为0．01的DMEM培养基；损伤组给予体积分数为0．01的胎牛血清与浓度为5μg／L的TNF-a混合的DMEM培养基；含药组为体积分数为0．01的六味地黄丸含药血清加体积分数为0．01的胎牛血清与浓度为5μg／L的TNF-a混合的DMEM培养基。使用细胞增殖—毒性检测试剂盒（ CCK-8）检测各组兔退变椎间盘细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-13基因的表达差别。结果对照组椎间盘细胞初期正常生长，增殖良好，随着时间延长，细胞数量减少，凋亡细胞数量增多，细胞外基质胶原减少，细胞形态变化快。损伤组能够明显抑制椎间盘软细胞的增殖，细胞及细胞外基质胶原数量减少明显，同时间点比较，细胞凋亡数量增多，与正常组比较差异有统计学意义（P＜0．05），而含药组细胞增殖缓慢，细胞数量下降缓慢，细胞凋亡数量减少，细胞外基质胶原成分下降不明显，3组之间比较差异有统计学意义（P＜0．05）。与对照组比较，损伤组椎间盘细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达下调增加，基质金属蛋白酶-13基因表达上调明显。与损伤组比较，而六味地黄丸含药血清组椎间盘细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达上调，基质金属蛋白酶-13基因表达下调，3组比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论六味地黄丸含药血清能够抑制TNF-a诱导的兔退变椎间盘细胞损伤，起到延缓椎间盘损伤的作用。其机制可能与上调蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达及下调基质金属蛋白酶表达有关。目的：探討六味地黃汍對兔退變椎間盤髓覈及纖維環細胞的保護作用。方法選擇8月齡成年新西蘭兔6隻利用異常應力負荷及椎間失穩法建立新西蘭兔腰椎椎間盤退變模型，病理切片確認模型成功後，取椎間盤分離軟骨終闆，將髓覈及纖維環組織進行細胞培養，將生長良好的細胞隨機分為對照組、損傷組與含藥組。對照組細胞培養用胎牛血清體積分數為0．01的DMEM培養基；損傷組給予體積分數為0．01的胎牛血清與濃度為5μg／L的TNF-a混閤的DMEM培養基；含藥組為體積分數為0．01的六味地黃汍含藥血清加體積分數為0．01的胎牛血清與濃度為5μg／L的TNF-a混閤的DMEM培養基。使用細胞增殖—毒性檢測試劑盒（ CCK-8）檢測各組兔退變椎間盤細胞增殖的影響。實時熒光定量PCR檢測聚集蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、基質金屬蛋白酶-13基因的錶達差彆。結果對照組椎間盤細胞初期正常生長，增殖良好，隨著時間延長，細胞數量減少，凋亡細胞數量增多，細胞外基質膠原減少，細胞形態變化快。損傷組能夠明顯抑製椎間盤軟細胞的增殖，細胞及細胞外基質膠原數量減少明顯，同時間點比較，細胞凋亡數量增多，與正常組比較差異有統計學意義（P＜0．05），而含藥組細胞增殖緩慢，細胞數量下降緩慢，細胞凋亡數量減少，細胞外基質膠原成分下降不明顯，3組之間比較差異有統計學意義（P＜0．05）。與對照組比較，損傷組椎間盤細胞蛋白聚糖、Ⅱ型膠原mRNA錶達下調增加，基質金屬蛋白酶-13基因錶達上調明顯。與損傷組比較，而六味地黃汍含藥血清組椎間盤細胞蛋白聚糖、Ⅱ型膠原mRNA錶達上調，基質金屬蛋白酶-13基因錶達下調，3組比較差異有統計學意義（ P＜0．05）。結論六味地黃汍含藥血清能夠抑製TNF-a誘導的兔退變椎間盤細胞損傷，起到延緩椎間盤損傷的作用。其機製可能與上調蛋白聚糖及Ⅱ型膠原錶達及下調基質金屬蛋白酶錶達有關。
목적：탐토륙미지황환대토퇴변추간반수핵급섬유배세포적보호작용。방법선택8월령성년신서란토6지이용이상응력부하급추간실은법건립신서란토요추추간반퇴변모형，병리절편학인모형성공후，취추간반분리연골종판，장수핵급섬유배조직진행세포배양，장생장량호적세포수궤분위대조조、손상조여함약조。대조조세포배양용태우혈청체적분수위0．01적DMEM배양기；손상조급여체적분수위0．01적태우혈청여농도위5μg／L적TNF-a혼합적DMEM배양기；함약조위체적분수위0．01적륙미지황환함약혈청가체적분수위0．01적태우혈청여농도위5μg／L적TNF-a혼합적DMEM배양기。사용세포증식—독성검측시제합（ CCK-8）검측각조토퇴변추간반세포증식적영향。실시형광정량PCR검측취집단백취당、Ⅱ형효원、기질금속단백매-13기인적표체차별。결과대조조추간반세포초기정상생장，증식량호，수착시간연장，세포수량감소，조망세포수량증다，세포외기질효원감소，세포형태변화쾌。손상조능구명현억제추간반연세포적증식，세포급세포외기질효원수량감소명현，동시간점비교，세포조망수량증다，여정상조비교차이유통계학의의（P＜0．05），이함약조세포증식완만，세포수량하강완만，세포조망수량감소，세포외기질효원성분하강불명현，3조지간비교차이유통계학의의（P＜0．05）。여대조조비교，손상조추간반세포단백취당、Ⅱ형효원mRNA표체하조증가，기질금속단백매-13기인표체상조명현。여손상조비교，이륙미지황환함약혈청조추간반세포단백취당、Ⅱ형효원mRNA표체상조，기질금속단백매-13기인표체하조，3조비교차이유통계학의의（ P＜0．05）。결론륙미지황환함약혈청능구억제TNF-a유도적토퇴변추간반세포손상，기도연완추간반손상적작용。기궤제가능여상조단백취당급Ⅱ형효원표체급하조기질금속단백매표체유관。