农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2015年
3期
408-413
,共6页
张冬辉%郑雪莉%李昊%周智敏%吴景龙%隋丹丹%韩崇选
張鼕輝%鄭雪莉%李昊%週智敏%吳景龍%隋丹丹%韓崇選
장동휘%정설리%리호%주지민%오경룡%수단단%한숭선
中华鼢鼠%卵透明带3(ZP3)%真核表达%免疫不育%蛋白免疫印迹
中華鼢鼠%卵透明帶3(ZP3)%真覈錶達%免疫不育%蛋白免疫印跡
중화분서%란투명대3(ZP3)%진핵표체%면역불육%단백면역인적
Myospalax fontanierii%Zona pellucida 3 (ZP3)%Eukaryotic expression%Immunocontraception%Western blot
卵透明带3 (zona pellucida 3,ZP3)蛋白是精卵结合最重要的受体.为了构建中华鼢鼠(Myospalax ontanierii)卵透明带3(mZP3)基因真核表达载体,本研究利用PCR方法得到加入酶切位点的mZP3片段,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,体外转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)和尾静脉注射昆明小鼠(Mus musculus)体内,利用RT-PCR和Western bolt技术检测其表达情况.双酶切和基因测序鉴定结果表明,所构建的表达载体是pEGFP-mZP3;倒置显微镜观察到发绿色荧光的成功转染的细胞;RT-PCR和Western bolt检测结果表明,目的基因mZP3在CHO细胞中成功表达,并且小鼠肝脏内也检测到目的基因.研究结果表明,卵透明带3基因能够在CHO真核细胞内表达,为后期基因疫苗防治中华鼢鼠提供依据.
卵透明帶3 (zona pellucida 3,ZP3)蛋白是精卵結閤最重要的受體.為瞭構建中華鼢鼠(Myospalax ontanierii)卵透明帶3(mZP3)基因真覈錶達載體,本研究利用PCR方法得到加入酶切位點的mZP3片段,併將其剋隆到真覈錶達載體pEGFP-N1上,體外轉染中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)和尾靜脈註射昆明小鼠(Mus musculus)體內,利用RT-PCR和Western bolt技術檢測其錶達情況.雙酶切和基因測序鑒定結果錶明,所構建的錶達載體是pEGFP-mZP3;倒置顯微鏡觀察到髮綠色熒光的成功轉染的細胞;RT-PCR和Western bolt檢測結果錶明,目的基因mZP3在CHO細胞中成功錶達,併且小鼠肝髒內也檢測到目的基因.研究結果錶明,卵透明帶3基因能夠在CHO真覈細胞內錶達,為後期基因疫苗防治中華鼢鼠提供依據.
란투명대3 (zona pellucida 3,ZP3)단백시정란결합최중요적수체.위료구건중화분서(Myospalax ontanierii)란투명대3(mZP3)기인진핵표체재체,본연구이용PCR방법득도가입매절위점적mZP3편단,병장기극륭도진핵표체재체pEGFP-N1상,체외전염중국창서란소세포(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)화미정맥주사곤명소서(Mus musculus)체내,이용RT-PCR화Western bolt기술검측기표체정황.쌍매절화기인측서감정결과표명,소구건적표체재체시pEGFP-mZP3;도치현미경관찰도발록색형광적성공전염적세포;RT-PCR화Western bolt검측결과표명,목적기인mZP3재CHO세포중성공표체,병차소서간장내야검측도목적기인.연구결과표명,란투명대3기인능구재CHO진핵세포내표체,위후기기인역묘방치중화분서제공의거.
