CAJ | 학술논문

花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S)和胭脂碱合成酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene,tNOS)是转基因产品筛选检测中的首选参数,日常检测中发现,个别标准中用于筛选检测这两种元件的引物存在非特异性扩增和灵敏度差的问题.本研究收集了国内外标准中常用的扩增片段分别为195、165、147和123 bp的CaMV35S和扩增片段分别为180、172、165和118 bp的tNOS各4对引物,应用普通PCR和实时荧光(Real-time)PCR方法,对8对引物的特异性、灵敏度及在加工品中的扩增性进行了测试和适用性评价.结果表明,CaMV35S 165和147 bp引物具有很好的特异性,灵敏度高,在不同的加工品中也表现出强的检测能力,筛选检测效果最佳;195 bp引物扩增性稍差,且经常出现非特异性扩增;123 bp引物较其他引物扩增弱且扩增不稳定.tNOS 172和165bp引物具有很好的特异性,灵敏度高,在不同的加工品中也表现出强的检测能力,筛选检测效果最佳;180 bp引物扩增性较差,且易出现非特异扩增;118 bp引物较其他引物扩增弱且扩增不稳定.本研究通过普通PCR和实时荧光(Real-time)PCR对不同国标中出现的引物进行适用性评价,为转基因产品的检测监管提供可靠技术依据.
화야채화협병독35S계동자(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S)화연지감합성매기인종지자(terminator of nopaline synthase gene,tNOS)시전기인산품사선검측중적수선삼수,일상검측중발현,개별표준중용우사선검측저량충원건적인물존재비특이성확증화령민도차적문제.본연구수집료국내외표준중상용적확증편단분별위195、165、147화123 bp적CaMV35S화확증편단분별위180、172、165화118 bp적tNOS각4대인물,응용보통PCR화실시형광(Real-time)PCR방법,대8대인물적특이성、령민도급재가공품중적확증성진행료측시화괄용성평개.결과표명,CaMV35S 165화147 bp인물구유흔호적특이성,령민도고,재불동적가공품중야표현출강적검측능력,사선검측효과최가;195 bp인물확증성초차,차경상출현비특이성확증;123 bp인물교기타인물확증약차확증불은정.tNOS 172화165bp인물구유흔호적특이성,령민도고,재불동적가공품중야표현출강적검측능력,사선검측효과최가;180 bp인물확증성교차,차역출현비특이확증;118 bp인물교기타인물확증약차확증불은정.본연구통과보통PCR화실시형광(Real-time)PCR대불동국표중출현적인물진행괄용성평개,위전기인산품적검측감관제공가고기술의거.